معلومة

Chimeric Gene vs Fusion Gene؟

Chimeric Gene vs Fusion Gene؟


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

حسب ويكيبيديا عن الجينات الوهمية:

تختلف هذه الطفرات عن جينات الاندماج التي تدمج تسلسلات جينية كاملة في إطار قراءة واحد وغالبًا ما تحتفظ بوظائفها الأصلية.

لست متأكدًا تمامًا من أنني أفهم البيان. تفسيري هو أن جين الاندماج ينتج عن انتقال الحمض النووي في جين واحد ؛ لذلك ، "تحتفظ بوظائفها الأصلية". هذا يختلف عن الجين الوهمي حيث يتم نقل الحمض النووي من اثنين أو أكثر من الجينات المختلفة إلى موقع جديد لتشكيل جين جديد تمامًا.

هل تفسيري صحيح؟


يتكون الجين الخيمري من أجزاء من جينات أخرى بينما يتكون الجين الاندماجي من كامل الجينات الأخرى. غالبًا ما ترى في الأدبيات مصطلح جين الاندماج المستخدم في كلتا الحالتين.


Chimeric Gene vs Fusion Gene؟ - مادة الاحياء

ChimPipe هي طريقة حسابية للكشف عن النسخ الوراثية الجديدة التي يسببها النسخ وجينات الاندماج من بيانات Illumina Paired-End RNA-seq. فهو يجمع بين امتداد الوصلة ومعلومات القراءة ذات النهاية المزدوجة للكشف بدقة عن تقاطعات الوصلة الوراثية بدقة زوج القاعدة.

تم تطوير ChimPipe في [مجموعة البيولوجيا الحاسوبية لمعالجة الحمض النووي الريبي] (http://www.crg.eu/en/roderic_guigo) في برشلونة ، إسبانيا.

انتقل إلى علامة تبويب الإصدارات وقم بتنزيل أحدث إصدار.

انسخ مستودع git في حال كنت تريد أحدث إصدار من الكود:

لا يتطلب ChimPipe أي خطوة تثبيت أخرى. يأتي بالفعل مع ثنائيات GEMtools المترجمة مسبقًا. تمت كتابته بلغة Bash و Awk ويمكن تشغيله كتطبيق مستقل على أنظمة Linux المتنوعة.

  • 64 بت وحدة المعالجة المركزية
  • الرامات "الذاكرة العشوائية في الهواتف والحواسيب:

  • نظام Linux 64 بت
  • غنو awk
  • Bedtools الإصدار 2.20.1 أو أعلى
  • Samtools v0.1.19 أو أعلى
  • انفجار v2.2.29 + أو أعلى

يرجى مراجعة ChimPipe [التوثيق] (https://chimpipe.readthedocs.org/) للعثور على معلومات مفصلة حول:

يتم توزيع ChimPipe تحت GPLv3. استشر ملف [LICENSE] (https://github.com/Chimera-tools/ChimPipe/blob/master/LICENSE.txt) لمزيد من المعلومات.

لا تتردد في إرسال مشكلة في مستودع github الخاص بنا في حال كان لديك سؤال

انضم إلى [القائمة البريدية] الخاصة بـ ChimPipe (https://groups.google.com/forum/#!forum/chimpipe-mailing-list/) في حال كان لديك سؤال ، فأنت تريد الإبلاغ عن مشكلة أو طلب ميزة.

يرجى الاستشهاد بالمقالة التالية إذا كنت تستخدم ChimPipe في بحثك:


أصل وتطور جين الاندماج الوهمي في ذبابة الفاكهة تحت الطبقة السفلية ، ودي.

يعد فهم الآليات الطفرية والتطورية الكامنة وراء ظهور جينات جديدة أمرًا بالغ الأهمية لدراسات التطور الظاهري والجيني. هنا نصف مثالًا جديدًا لجين الاندماج الوهمي الذي تم تشكيله مؤخرًا والذي يحدث في ذبابة الفاكهة ، و D. madeirensis ، و D. هذا الجين الجديد ، الذي نسميه Adh-Twain ، نتج عن Adh mRNA الذي تم نقله إلى الجين الشبيه بـ Gapdh ، CG9010. تم نسخ Adh-Twain للمروجين 5 وأنماط النسخ تبدو مشابهة لتلك الموجودة في CG9010. تشير التحليلات الوراثية والتطور السكاني إلى أن تسلسل الأحماض الأمينية لـ Adh-Twain قد تطور بسرعة عبر الانتقاء الاتجاهي بعد وقت قصير من ظهوره. ومع ذلك ، يتميز تاريخها الأكثر حداثة بتطور أبطأ يتوافق مع القيود الوظيفية المتزايدة. نقدم نموذجًا لأصل هذا الجين الجديد ونناقش العوامل الوراثية والتطورية التي تؤثر على تطور الجينات والوظائف الجديدة.

الأرقام

أنماط النسخ من Adh-Twain و…

أنماط النسخ من Adh-Twain و سي جي 9010 متشابهة. استخدمنا RT-PCR لتضخيم ...

5′-UTR والمروجون متشابهون ...

5′-UTR والمروجين متشابهون مع Adh-Twain (D. sub Fusion) و سي جي 9010 و…

ميزات التسلسل الرئيسية Adh-Twain…

ميزات التسلسل الرئيسية Adh-Twain مقارنة بأنماط تعدد الأشكال والتباعد. (أ)…

بدائل النوكليوتيدات في Adh و…

بدائل النوكليوتيدات في Adh و سي جي 9010 مناطق Adh-Twain وجيناتهم الأبوية ...

نموذج للتطور ...

نموذج لتطور Adh-Twain . (أ) ازدواجية الكروموسومات CG9010 ...


نتائج

التطور التكيفي المبكر لـ CFGs. من خلال مقارنة نسبة غير المرادفات إلى البدائل المترادفة (Dn / Ds) ، يمكننا تحديد ما إذا كان التطور السريع للأحماض الأمينية على طول فرع من سلالة السلالة يتوافق مع التطور التكيفي. تشير النسب الأقل من 1 إلى وجود قيود وظيفية على تسلسل الأحماض الأمينية للبروتين. تتوافق النسب حول 1 مع القيد الوظيفي المنخفض أو التطور المحايد للبروتين. تشير النسب الأكبر من 1 إلى اختيار اتجاهي للبروتين. جونز وآخرون. (19) ذكرت أن Adh منطقة Adh-Twain في D. subobscura ، D. Madeirensis، و د يُظهر دليلًا قويًا على التطور التكيفي بعد فترة وجيزة من تكوين CFG هذا (Dn / Ds & # x000bb 1). بعد انتواع D. subobscura و د، تنخفض نسبة Dn / Ds إلى أقل بكثير من 1 (0.399) ، بما يتوافق مع زيادة القيد الوظيفي ، على الرغم من أن هذه النسبة لا تزال تقريبًا مرتبة من حيث الحجم أكبر من النسبة التي لوحظت من أجل Adh في هذه السلالات (0.0411).

اقترح كل من Long and Langley (14) و Begun (16) أنه كان هناك معدل مرتفع لاستبدال الأحماض الأمينية بعد تكوين جينغوي و Adh-Finnegan، على التوالى. لم تكن نماذج الاحتمالية القصوى المستندة إلى Codon لتطور التسلسل متاحة في وقت هذه الأوراق السابقة. جونز وآخرون. (19) ، ومع ذلك ، استخدموا هذه النماذج لتحليلهم Adh-Twain في D. subobscura وأقاربها. لتحقيق الاتساق ، قمنا بإعادة تحليل البيانات من جينغوي و Adh-Finnegan باستخدام هذه الأدوات الحديثة.

لتحديد ما إذا كان النمط الذي تمت ملاحظته Adh-Twain تم عكسه بواسطة جينغوي و Adh-Finnegan، استخدمنا أقصى احتمال لمقارنة نماذج تطور التسلسل. Adh-Twain تحليل جونز وآخرون. (19) اقترح ما لا يقل عن ثلاث نسب Dn / Ds متميزة على طول فروع أشجار الجينات لدينا من CFGs و Adh Paralogs. يجب أن يكون لمعظم فروع الشجرة ، بما في ذلك سلف CFG ، نسبة واحدة. يجب أن يكون للفرع بعد تشكيل CFG مباشرة نسبة مختلفة. يجب أن يكون لفروع CFG الموجودة نسبة ثالثة (نموذج ثلاثي النسبة).

استخدام Adh و جينغوي متواليات من D. melanogaster، D. orena، D. tessieri، Drosophila tsacasi، و د. ياكوبا، أظهرنا أن نموذج نسبة Dn / Ds الثلاثة كان الأفضل. قارنا هذا النموذج ذي النسبة الثلاثة بنموذج النسبة الواحدة (جميع الفروع مقيدة بنسبة Dn / Ds واحدة) ، بنموذج النسبة الحرة (جميع الفروع لها نسب Dn / Ds مستقلة) ، وبنسبة ثنائية نموذج (جينغوي الفروع لها نسبة Dn / Ds واحدة ، وجميع الفروع الأخرى لها نسبة مختلفة). يناسب نموذج نسبة Dn / Ds الثلاثة البيانات بشكل أفضل من نموذج النسبة الواحدة (نموذج النسبة الثلاثة ln ل = & # x020131800.72. بحيث ل هو احتمال نموذج نسبة واحدة ln ل = & # x020131815.24 ثلاثة مقابل نسبة واحدة ، 2 & # x00394ln ل = 29.04 ، مدافع = 2 ، ص & # x0003c 0.0001) ، وأفضل من النموذج ثنائي النسبة (نموذج ثنائي النسبة ln ل = & # x020131804.43 نسبة ثلاثة مقابل اثنين ، 2 & # x00394ln ل = 7.42 ، مدافع = 1 ، ص = 0.0065). لم يتلاءم نموذج النسبة الحرة الغنية بالمعلمات مع البيانات بشكل أفضل من نموذج النسبة الثلاثة (نموذج النسبة الحرة ln ل = & # x020131792.31 ثلاثة مقابل النسبة المجانية ، 2 & # x00394ln ل = 16.82 ، مدافع = 9 ، ص = 0.052). استكشفنا أيضًا بعض الاختلافات الأخرى لهذه النماذج ، والتي لا يتناسب أي منها مع البيانات بشكل أفضل من نموذج النسبة الثلاثة (البيانات غير معروضة).

على الرغم من أن نسبة Dn / Ds هي & # x0003e1 للفرع مباشرة بعد تكوين جينغوي، إشارة بدائل الأحماض الأمينية التكيفية ليست قوية مثل تلك التي لوحظت Adh-Twain (مبكرا جينغوي الفرع ، Dn / Ds = 1.27 لاحقًا جينغوي الفروع ، Dn / Ds = 0.123 و Adh الفروع ، Dn / Ds = 0.036). ومع ذلك ، فإن نسب Dn / Ds لمجموعتي جينغوي الفروع 35 مرة و 3.4 مرة أكبر من Adh الأنساب ، على التوالي. هذا النمط يتوافق أيضًا مع ذلك الذي لوحظ لـ Adh-Twain. ومن الجدير بالذكر أنه إذا كان بعيد المنال D. tsacasi تمت إزالته من التحليل ، لا يزال نموذج النسبة الثلاثة مدعومًا بشكل كبير (نسبة ثلاثة مقابل اثنين ، 2 & # x00394ln ل = 11.4 ، مدافع = 1 ، ص = 0.0008). في هذه الحالة ، تكون نسبة Dn / Ds إلى حد كبير & # x0003e1 (قدرنا 12 استبدالًا غير مجهول إلى 0 استبدالات مترادفة).

Adh-Finnegan أقدم من جينغوي و Adh-Twain وهو موجود في عدد كبير من مليئة مجموعة الأنواع (15 ، 16). مقارنة Adh-Finnegan إلى Adh في هذه المجموعة معقد بسبب وجود عدة Adh الازدواجية في هذه الأنساب. على الرغم من هذه الاختلافات عن التحليلات السابقة ، يبقى النمط العام كما هو. مرة أخرى ، يناسب نموذج نسبة Dn / Ds الثلاثة البيانات بشكل أفضل من نموذج النسبة الواحدة (نموذج النسبة الثلاثة ln ل = & # x020134886.19 نموذج بنسبة واحدة ln ل = & # x020134904.90 ثلاثة مقابل نسبة واحدة ، 2 & # x00394ln ل = 37.42 ، مدافع = 2 ، ص & # x0003c 0.0001) وأفضل من النموذج ثنائي النسبة (نموذج ثنائي النسبة ln ل = & # x020134،902.08 نسبة ثلاثة مقابل اثنين ، 2 & # x00394ln ل = 31.78 ، مدافع = 1 ، ص & # x0003c 0.0001). لم يتلاءم نموذج النسبة الحرة الغنية بالمعلمات مع البيانات بشكل أفضل من نموذج النسبة الثلاثة (نموذج النسبة الحرة ln ل = & # x020134،866.52 ثلاثة مقابل النسبة المجانية ، 2 & # x00394ln ل = 39.34 ، مدافع = 27 ، ص = 0.059).

Dn / Ds هو 2.67 للفرع مباشرة بعد تشكيل Adh-Finnegan، مما يشير مرة أخرى إلى التطور التكيفي المبكر في Adh منطقة Adh-Finnegan. كما لوحظ في Adh-Twain و جينغوي، معدل استبدال الأحماض الأمينية عند Adh-Finnegan يتباطأ بشكل كبير بعد هذه الجولة الأولية من التطور التكيفي (لاحقًا Adh-Finnegan الفروع ، Dn / Ds = 0.096 Adh الفروع ، Dn / Ds = 0.080).

تشير هذه التحليلات الثلاثة إلى أن بروتينات جميع CFGs الثلاثة تطورت بشكل تكيفي بعد وقت قصير من تكوينها (الشكل 1). كان التطور اللاحق أكثر تقييدًا على الرغم من أنه عادةً ما يكون أسرع مما يُلاحظ عادةً ذبابة الفاكهة Adh.

تسلسل البروتين الجديد Adh- تتطور CFGs المشتقة بسرعة بعد فترة وجيزة من تكوين هذه الجينات. مقارنة Dn (اليسار) و دس (حق) ل Adh-Twain, جينغوي، و Adh-Finnegan كما تم تقديره بواسطة نموذج النسبة الثلاث لدينا (انظر نتائج). يسلط اللون الأحمر الضوء على فروع Dn مباشرة بعد تكوين الجينات الجديدة. تشير الأسهم الحمراء إلى مكان وجود فروع Ds المكافئة أو ستكون موجودة إذا كانت موجودة. يشير اللون الأخضر إلى فروع CFG اللاحقة. يشير اللون الأزرق Adh الأنساب.

مواقع بدائل الأحماض الأمينية المبكرة. يشير الاندفاع المبكر لتطور الأحماض الأمينية التكيفية في جينات الاندماج الثلاثة هذه إلى وجود تشابه أساسي في وتيرة التطور في هذه الجينات الجديدة. درسنا بعد ذلك ما إذا كان هناك تشابه بين البروتينات الجديدة فيما يتعلق بالأحماض الأمينية التي تطورت.

استخدمنا حالات الأجداد التي أعيد بناؤها لتحديد التغيرات في الأحماض الأمينية التي حدثت بعد وقت قصير من تكوين كل جين جديد. ثم قمنا بمقارنة CFGs مع بعضنا البعض وحددنا عدد المرات التي تغير فيها نفس موضع الأحماض الأمينية في زوج من هذه الجينات. كما يوضح الجدول 1 ، تغيرت العديد من نفس الأحماض الأمينية في جميع CFGs الثلاثة. استخدمنا اختبارًا ذي الحدين لتحديد احتمال أن نلاحظ هذا التداخل لكل جين بالصدفة وحدها (المعنى المرجع. 28). يفترض هذا الاختبار نموذجًا فارغًا يكون فيه استبدال الحمض الأميني في جين اندماج واحد مستقلًا عن آخر (على سبيل المثال ، التطور في جينغوي مستقل عن Adh-Finnegan) ، وأن هذه الاستبدالات يمكن أن تحدث في أي مكان في الجين (كما لو لم يكن هناك قيد على الأحماض الأمينية التي يمكن أن تتغير). مرة أخرى ، يوضح لنا الجدول 1 أن هذا التشابه المذهل لنمط الاستبدال لا يمكن أن يُعزى إلى الصدفة.

الجدول 1.

مقارنة الجينات ٪ من المواقع المشتركة * ص القيمة & # x02020
جينغوي إلى Adh-Twain 45 (5 من 11) 0.005
جينغوي إلى Adh-Finnegan 63 (7 من 11) & # x0003e0.001
Adh-Finnegan إلى جينغوي 30 (7 من 23) 0.004
Adh-Finnegan إلى Adh-Twain 30 (7 من 23) 0.004
Adh-Twain إلى Adh-Finnegan 50 (7 من 14) & # x0003e0.001
Adh-Twain إلى جينغوي 36 (5 من 14) 0.021

يعتمد الاختبار أعلاه على الافتراض المشكوك فيه أن التغييرات محتملة بالتساوي في جميع المخلفات. الفرضية البديلة للتوازي التي لوحظت هي أن بعض المواقع في Adh أقل تقييدًا وظيفيًا من غيرها ، وبالتالي تسمح ببدائل الأحماض الأمينية (الموازية). اختبرنا هذه الفكرة بطريقتين. أولاً ، حددنا مواضع الاستبدالات في Adh للفرع المكافئ ، أي الفرع الأول المؤدي إلى Adh بدلا من CFG بعد تشكيل CFG. عبر جميع CFG الثلاثة & # x02013Adh مجموعات البيانات ، حدث ما مجموعه سبعة تغييرات في الأحماض الأمينية على طول هذه Adh الفروع ، التي لم يتم تقاسم أي منها. على الرغم من اتساقها مع ملاحظتنا ، إلا أن هذه البيانات غير كافية لاختبار فرضيتنا (على الرغم من أن المرء يتوقع ، بناءً على بياناتنا الخاصة بـ CFGs ، أنه يجب مشاركة ثلاثة مواقع تقريبًا). تضمن اختبارنا الثاني تحديد مواقع الأحماض الأمينية التي تتطور ولا تتطور Adh. اجتمعنا 61 Adh متواليات من 55 ذبابة الفاكهة الأنواع وأقاربهم. من بين 254 موقعًا متماثلًا ، لم يظهر 118 موضعًا من الأحماض الأمينية أي اختلاف في أي من هذه الأنواع (مواقع محفوظة). من المحتمل أن تكون هذه المواقع مهمة لـ Adh وظيفة. عندما قارنا مواقع الأحماض الأمينية هذه مع تلك الموجودة في الطفرات الصفرية أو ناقصة الشكل المعروفة في D. melanogaster Adh، 32 من 43 (74٪) طفرات معروفة لتغيير الأحماض الأمينية (باستثناء طفرات وقف الكودون المبكرة) تحدث في هذه المواضع المحفوظة. (العديد من الطفرات الـ 11 التي لا تحدث في المواضع المحفوظة هي طفرات للأحماض الأمينية لا تُلاحظ عادةً في هذا الموقع في Adh.)

ومع ذلك ، فإن 25 ٪ (8 من 32) من التغييرات المبكرة في CFGs الثلاثة حدثت في المواقع المحفوظة (ص = 0.0024 أن التغييرات الملاحظة تختلف عن Adh- التوقع المستمد) نصف (4 من 8) من هذه التغييرات المبكرة التي تحدث في المواقع المحفوظة يتم تقاسمها من قبل اثنين على الأقل من CFGs. تجادل هذه الملاحظات بشدة ضد الفرضية القائلة بأن عدم وجود قيود وظيفية يدفع التشابه في مواقف تغيرات الأحماض الأمينية في Adh منطقة CFGs. التفسير البديل هو أن الاختيار الاتجاهي القوي يقود التطور المتقارب في هذه المواقع.

تقارب بدائل الأحماض الأمينية المبكرة. أربعة من المواقع السبعة المشتركة للتغيرات المبكرة في الأحماض الأمينية في Adh-Twain و Adh-Finnegan هي انتقالات إلى نفس الأحماض الأمينية. وبالمثل ، فإن جينغوي إلى Adh-Twain تشير المقارنة إلى أن أربعة من البدائل الخمسة للأحماض الأمينية المشتركة كانت لنفس الحمض الأميني. يشير هذا النمط إلى درجة مدهشة من التقارب الكيميائي الحيوي. ومع ذلك ، هناك تغيير واحد فقط من التغييرات السبعة المشتركة بينهما جينغوي و Adh-Finnegan كان لنفس الحمض الأميني.

أحد التفسيرات للدرجة العالية من التقارب الكيميائي الحيوي هو أنه قطعة أثرية ناشئة عن بعض التحيز في إعادة بناء دول الأجداد. هذا التفسير غير محتمل. كان لجميع التغييرات المشتركة التي أعيد بناؤها احتمال 95٪ أو أكبر ، باستثناء واحد في Adh-Finnegan، والتي كانت 76٪ فقط. هذا الموقع ، ومع ذلك ، ليس الموقع الذي لوحظ تقارب الأحماض الأمينية. ثانيًا ، بالنسبة للمواقع التي بها نفس تغيرات الأحماض الأمينية ، نظرنا إلى إعادة بناء موقع البخل (29). في جميع الحالات ، كان متطابقًا بشكل عام مع عمليات إعادة البناء الهامشية والمشتركة. ثالثًا ، قمنا بتقييم عدد المرات التي تختلف فيها هذه المواقع عبر جميع التسلسلات الموجودة في مجموعة البيانات الخاصة بنا. يتغير واحد فقط من التغييرات المشتركة عبر Adh التسلسلات (الموقع 245). تختلف ثلاثة من المواقع في أنساب CFG ، اثنان في Adh-Finnegan (الموقعان 68 و 219) وواحد في Adh-Twain (الموقع 127) ، ولكن كل من هذه التغييرات يقتصر على نوع واحد. تشير هذه البيانات إلى أن التقارب الذي لوحظ في هذه المواقع ليس نتيجة ثانوية للطرق المستخدمة لإعادة بناء تسلسلات الأجداد هذه.

بشكل رسمي ، من الممكن أن يكون التقارب الكيميائي الحيوي الملحوظ ناتجًا عن تحيز استبدال قوي تجاه قاعدة أو قواعد معينة. ومع ذلك ، لم نلاحظ أي أنماط واضحة لمثل هذا التحيز. كان الاستبدال الأكثر شيوعًا فريدًا لكل جين: in Adh-Twain، كان من G إلى T في جينغوي، كان من C إلى G ومن G إلى A وفي Adh-Finneganكان من C إلى A. في كليهما جينغوي و Adh-Finnegan، تم استبداله أكثر من أي قاعدة أخرى ، على الرغم من اختلاف النسب (43٪ و 58٪ على التوالي). Ts ، عند 37 ٪ ، تم استبدال القاعدة الأكثر شيوعًا في Adh-Twain. كاختبار إضافي ، قمنا بمقارنة نسب معدل الانتقال / التحويل (& # x003ba) بين جميع مجموعات بيانات CFG الثلاثة. في حالة وجود تحيز بديل مشترك ، قد يتوقع المرء أن & # x003ba سيكون متشابهًا عبر هذه الجينات. اختبرنا هذه الفكرة من خلال إصلاح & # x003ba من CFG واحد & # x02013Adh مجموعة البيانات مع المقدرة & # x003ba من مجموعتي البيانات الأخريين ومعرفة ما إذا كان هذا يوفر ملاءمة أفضل للبيانات من & # x003ba المقدرة من ذلك CFG المحدد & # x02013Adh مجموعة البيانات. هذا الاختبار متحفظ ، لأن الثابت & # x003ba لديه درجات حرية أقل من المقدرة & # x003ba. تتلاءم القيمة المقدرة & # x003ba بشكل عام بشكل أفضل بشكل ملحوظ من & # x003ba من CFG & # x02013 الأخرىAdh مجموعات البيانات ، باستثناء واحد (التحليل غير معروض). جينغوي باستخدام Adh-Finnegan & # x003ba كان حدًا (ص = 0.074 ، على الرغم من أن Adh-Finnegan مع جينغوي كان & # x003ba أكثر ملاءمةً للبيانات (ص = 0.0002). ومن المثير للاهتمام ، على الرغم من قابلية تبادل نسب معدل الانتقال / التحويل ، جينغوي و Adh-Finnegan كان لديه أقل تغيرات مماثلة في الأحماض الأمينية. هذه التحليلات تجعل من غير المحتمل أن تكون التغيرات المشتركة التي لوحظت في الأحماض الأمينية قد تطورت بالصدفة. تترك هذه الملاحظة الانتقاء الطبيعي باعتباره التفسير الأكثر ترجيحًا للتوازي المستشري الذي لوحظ في البيانات.


جينات الاندروجين الأكثر شيوعًا في سرطان البروستاتا

تنطوي إعادة الترتيب الجيني الأكثر انتشارًا في سرطان البروستاتا على اندماج الجين الذي ينظمه الأندروجين تمبرس 2 مع عامل النسخ ETS أرج، والذي يُقدر أنه يحدث في & # x0007E50 ٪ من حالات سرطان البروستاتا (Tomlins et al. ، 2005 Kumar-Sinha et al. ، 2008) هو إلى حد بعيد جين الاندماج الجيني الأكثر شيوعًا في الأورام الصلبة (PCAWG Transcriptome Core Group et آل ، 2020). على وجه الخصوص ، أكثر من 50 ٪ من أحداث الاندماج هذه تنضم إلى إنترون الأول من تمبرس 2 مع الإنترون الثالث من أرج ويؤدي إلى الأكثر شيوعًا TMPRSS2: أرج نسخة الاندماج مرنا جنبًا إلى جنب مع إكسون 1 من تمبرس 2 مع exon 4 من أرج (ويير وآخرون ، 2013) (الشكل 2). عدة أخرى TMPRSS2: أرج تم أيضًا وصف أحداث الاندماج مع مواقع الوصلات المختلفة في العينات السريرية لسرطان البروستاتا بتواتر أقل (Kumar-Sinha et al. ، 2008 Weier et al. ، 2013). ال TMPRSS2: أرج الاندماج موجود في خط خلايا سرطان البروستاتا VCaP (Tomlins et al. ، 2005) وقد تم مؤخرًا تمييزه بشكل جيد في هذا النموذج. إنه يؤوي إعادة ترتيب داخل الجين بين الإنترونات 1 و 4 من تمبرس 2 وإعادة ترتيب لاحقة بين الجينات مع intron 3 من أرج (ويير وآخرون ، 2013). وجد أن تحفيز الأندروجين لخلايا VCaP يسبب زيادة ملحوظة في تعبير ERG ، في حين أن الأندروجينات لم تؤثر على مستويات ERG في خلايا LNCaP سلبية الاندماج ، مما يؤكد أن تنظيم الأندروجين أرج ناتج عن الاندماج مع تمبرس 2 (توملينس وآخرون ، 2005). علاوة على ذلك ، فإن الضربة القاضية لـ ERG بوساطة siRNA في خلايا VCaP تمنع بشكل كبير الغزو دون التأثير على الانتشار (Tomlins et al. ، 2008a). نظرًا لانتشارها وتوافر نموذج خط الخلية إيجابي الاندماج ، فإن أهمية TMPRSS2-ERG لخلايا سرطان البروستاتا والمظاهر السريرية للمرض تمت دراستها على نطاق واسع وسيتم مناقشتها بمزيد من التفصيل في الفصول التالية.

تمبرس 2 تشارك أيضًا في نسبة صغيرة من عمليات إعادة الترتيب مع أفراد عائلة "خدمات الاختبارات التربوية" ETV1 (Tomlins وآخرون ، 2005 ، 2007) ، ETV4 (Tomlins وآخرون ، 2006) ، و ETV5 (Helgeson et al. ، 2008) (الشكل 2). في ال TMPRSS2-ETV1 حدث الانصهار ، إكسون 1 من تمبرس 2 ينضم إكسون 4 من ETV1، مما أدى إلى إعادة ترتيب مشابه جدًا لـ TMPRSS2: أرج جين الانصهار. على الرغم من الإبلاغ عن أن خلايا LNCaP لديها تعبير مفرط ملحوظ عن ETV1 (Tomlins et al. ، 2005) ، لم يتم العثور عليها لإيواء TMPRSS2: ETV1 الاندماج (Tomlins et al. ، 2007). تم العثور على تعبير مفرط ETV1 بوساطة ناقلات الفيروس في خط الخلايا الظهارية للبروستاتا الخالد RWPE ليس له أي تأثير في تكاثر الخلايا ، ولكن لزيادة غزو الخلايا (Tomlins et al. ، 2007). علاوة على ذلك ، تم العثور على تنظيم ETV1 بوساطة الأندروجين في خلايا LNCaP للحث على التعبير عن البروتينات المعدنية المصفوفة (MMPs) المسؤولة عن تدهور المصفوفة خارج الخلية والغشاء القاعدي. تم العثور على هدم سيرنا لـ ETV1 في خلايا LNCaP المعتمدة على الأندروجين وكذلك خلايا C81 المستقلة عن الأندروجين لتقليل الغزو بشكل كبير ويشير إلى دور ETV1 في تطور المرض (كاي وآخرون ، 2007). في ال TMPRSS2: ETV4 حدث الانصهار ، منطقة تنظيمية قصيرة 8 كيلو بايت من المنبع تمبرس 2 ويحتوي على مُحسِّن ينظم الأندروجين جنبًا إلى جنب مع منطقة intronic مباشرة أعلى المنبع من exon 3 من ETV4. لم يتم الإبلاغ عن جين الاندماج هذا في خطوط خلايا سرطان البروستاتا ، ولكن التعبير الأصلي ETV4 موجود في خلايا RWPE و PC-3 و DU145 ، كما أن تنظيمه يمنع تكاثر خلايا سرطان البروستاتا ونموها المستقل عن الإرساء وهجرة خلايا سرطان البروستاتا (Pellecchia et al. ، 2012). في الآونة الأخيرة ، شارك في التعبير عن ETV1 و ETV4 تم العثور عليه في خطوط خلايا سرطان البروستاتا PC-3 و MDA-PCa-2b ، والتي تمثل نماذج للأمراض المتقدمة. إسكات أي من أفراد عائلة ETS لم يؤثر على الانتشار أو موت الخلايا المبرمج. لكن، ETV4 أظهرت الخلايا المهدمة انخفاضًا كبيرًا في تكوين المستعمرة ، بينما ETV1 أظهرت الخلايا المهدمة انخفاضًا كبيرًا في غزو الخلايا ، مما يؤكد دورًا ذا صلة بـ ETV1 في تطور المرض (Mesquita et al. ، 2015). في ال TMPRSS2: ETV5 حدث الانصهار ، exons 1 إلى 3 من تمبرس 2 يتم دمجها في exon 2 من ETV5. على الرغم من أن إعادة الترتيب هذه غائبة أيضًا في جميع خطوط خلايا سرطان البروستاتا المعروفة ، إلا أن الدراسات الوظيفية للإفراط في التعبير عن ETV5 التي أجريت على نموذج RWPE أنتجت نتائج مشابهة جدًا لتلك التي تم الحصول عليها باستخدام نموذج التعبير الزائد RWPE-ETV1 (Helgeson et al. ، 2008).

في الآونة الأخيرة ، تم الإبلاغ عن حدث اندماج جديد في حوالي 1 ٪ من حالات سرطان البروستاتا ، جنبًا إلى جنب مع exons 1 أو 2 من تمبرس 2 إلى exon 2 من مثبط SMAD وعامل الورم مهارة ويؤدي إلى إفراط في التعبير. تم العثور على تقليل تنظيم تعبير SKIL في خلايا PC-3 لتقليل نمو الخلايا والغزو وتكوين المستعمرة ، بينما أظهر التعبير المفرط لـ SKIL في خلايا RWPE زيادة ملحوظة في الإمكانات الغازية (Annala et al. ، 2015). ETV1 ، ETV5، و مهارة تم العثور أيضًا على شركاء اندماج 3 & # x02032-prime مع عائلة حامل الجين المذاب الخاص بالبروستاتا الخاصة بالبروستاتا 45 ، العضو 3 (SLC45A3) ، يشار إليه أيضًا باسم البروستين ، كشريك 5 & # x02032 (Tomlins et al. ، 2007 Helgeson et al. ، 2008 Annala et al. ، 2015) (الشكل 2). في أحداث الاندماج هذه ، exon 1 من SLC45A3 إلى جانب exon 5 من ETV1 (Tomlins وآخرون ، 2007) ، exon 8 من ETV5 (Helgeson et al. ، 2008) أو exon 2 من مهارة (أنالا وآخرون ، 2015). هؤلاء SLC45A3-ETS الاندماج والانصهار التي تنطوي على مهارة لم يتم الإبلاغ عنها في خطوط خلايا سرطان البروستاتا. ومع ذلك ، فقد أظهرت دراسة حديثة أن العلاج المتزامن لخلايا LNCaP مع الأندروجينات والإشعاع الناجم عن TMPRSS2: ERG و TMPRSS2: ETV1 و SLC45A3: ETV1. أكد التسلسل الجينومي صحة أحداث الاندماج على المستوى الكروموسومي ، مما يشير إلى دور محتمل للواقع المعزز في تعزيز عمليات نقل الورم (Lin et al. ، 2009).

في الآونة الأخيرة ، حدد تشاكرافارثي وزملاؤه اندماجًا يحدث في حوالي 30٪ من حالات سرطان البروستاتا الأولية ويشمل الجين المستهدف AR KLK4 كشريك 5 & # x02032 والجين الزائف غير المشفر KLKP1 (شاكرافارثي وآخرون ، 2019). ينتمي كل من KLK4 و KLKP1 إلى عائلة kallikrein من بروتينات السيرين ، وتقع جيناتهما بجوار بعضها البعض في مجموعة من 15 جينًا على الكروموسوم 19 (q13.33 & # x02013q13.41) ، والتي تحتوي أيضًا على الجينات المعروفة. KLK3 (PSA). يتم تشكيل اندماج KLK4-KLKP1 إما عن طريق آلية عبر الربط أو اندماج في الإطار بسبب الحذف الصغير ، مما يؤدي إلى اندماج أول اثنين من exons KLK4 مع exon 4 و 5 من KLKP1. يتنبأ التسلسل الكيميري الناتج عن بروتين حمض أميني 164 & # x02013 ، والذي يُشتق الثلث الأخير منه من KLKP1 ، مما يؤدي إلى تحويل الجين الزائف غير المشفر إلى جين مشفر للبروتين. باستخدام ثقافة الخلية ومقايسة غشاء المشيمة للدجاج (CAM) ، تبين أن التعبير عن نسخة الاندماج KLK4-KLKP1 يؤثر على تكاثر الخلايا ، وغزو الخلايا ، والتداخل ، وتشكيل الورم (Chakravarthi et al. ، 2019).

بالإضافة إلى ذلك ، كشف تسلسل النسخ لسرطان البروستاتا السلبي الانصهار ETS عن عمليات إعادة ترتيب جينية تشمل أفراد عائلة RAF-kinase ، أي SLC45A3-BRAF و ESRP1-RAF1 ، المتكرر في حوالي 2٪ من حالات PCa المتقدمة ، الأولى كانت خاضعة للتنظيم AR ( Palanisamy et al. ، 2010). أظهر التعبير المنتبذ لكلا الوهميين في الخلايا الظهارية للبروستات زيادة في خصائص الأورام ، وترتبط جينات اندماج RAF-kinase هذه عمومًا بسمات المرض المتقدم ، مثل درجة غليسون العالية ومقاومة الإخصاء (Palanisamy et al. ، 2010 Beltran et al. ، 2013 Ross et al.، 2016 Pederzoli et al.، 2020). بالإضافة إلى جينات الاندماج المذكورة أعلاه ، تم وصف عدد كبير من جينات اندماج سرطان البروستاتا الأخرى في المواد السريرية (Tomlins et al. ، 2007 Kumar-Sinha et al. ، 2008 Weier et al. ، 2013). تحدث معظم هذه الترددات بترددات منخفضة جدًا و / أو لم تتم دراستها بشكل أكبر ، غالبًا بسبب نقص النماذج الخلوية التي تعبر عنها.


شكر وتقدير

نشكر M. Antezana لاقتراح الفرضية الهيكلية لأعضاء الاختلاف في مختبر Begun ومجموعة مناقشة Evolution في جامعة كاليفورنيا ، Davis M. اقتراح إحصائي مفيد ومراجعان ثاقبان للعديد من الاقتراحات التي حسنت المخطوطة وساعدتنا على التفكير النقدي في نموذج التحول الخاص بنا. تم دعم هذا العمل من خلال منح مؤسسة العلوم الوطنية (إلى CDJ و MCB 9973804 إلى D.J.B.).


الكيميرا والفسيفساء هي كائنات حية تتطور بسبب التوليفات الجينية. الفرق الرئيسي بين الوهم والفسيفساء هو عدد الزيجوت المشاركة في التطور الجنيني. في الكيميرا ، يتم دمج اثنين من البيضة الملقحة بينما في الفسيفساء ، يشارك زيجوت واحد فقط في تكوين جنين الفسيفساء. لذلك ، يشارك أربعة آباء على الأقل في تكوين الوهم بينما يشارك والدان في تشكيل الفسيفساء.

يلخص الرسم البياني أدناه الفرق بين الوهم والفسيفساء.


التحليل الجزيئي والخلوي الوراثي

ابيضاض الدم النخاعي المزمن (CML)

يمكن اكتشاف كروموسوم فيلادلفيا (Ph) الناتج عن انتقال t (922) في 95٪ من حالات سرطان الدم النخاعي المزمن عن طريق الدراسات الوراثية الخلوية الروتينية ، لكن الشذوذ يكون شبه مجهري في الـ 5٪ المتبقية. في جميع الحالات يمكن تأكيد وجودها عن طريق الكشف عن BCR-ABL1 جين الانصهار ، عن طريق FISH ، أو عن طريق الكشف عن نصه بواسطة RT-PCR. تم العثور على كروموسوم Ph أيضًا في ج. 25٪ و 5٪ من البالغين والطفولة ALL ، على التوالي ، 26 حيث يرتبط بتكهن أسوأ نسبيًا ويشير إلى الحاجة إلى تضمين مثبط التيروزين كيناز (TKI) بالإضافة إلى العلاج الكيميائي القياسي. يجب اختبار المرضى المشتبه في إصابتهم بسرطان الدم النخاعي المزمن أو ورم تكاثري نقوي آخر BCR-ABL1 للتشخيص النهائي. لتحسين الإدارة السريرية ، يجب أيضًا اختبار المرضى الذين يعانون من ALL BCR-ABL1.


معلومات الكاتب

ساهم كل من بيلار لوبيز-نييفا ، وبابلو فرنانديز-نافارو ، وأوزفالدو غراانيا كاسترو ، وإدواردو أندريس ليون ، بالتساوي.

الانتماءات

قسم البيولوجيا الخلوية والمناعة ، مركز Severo Ochoa للبيولوجيا الجزيئية (CBMSO) ، CSIC-Madrid Autonomous University ، مدريد ، 28049 ، إسبانيا

بيلار لوبيز-نيفا ، خافيير سانتوس ، ماريا فيلا موراليس ، ماريا أنجيليس كوبوس-فرنانديز ، لورا غونزاليس-سانشيز وخوسيه فرنانديز-بيكيراس

معهد البحوث الصحية مؤسسة خيمينيز دياز ، مدريد ، 28040 ، إسبانيا

بيلار لوبيز-نيفا ، خافيير سانتوس ، ماريا فيلا موراليس ، ماريا أنجيليس كوبوس-فرنانديز ، لورا غونزاليس-سانشيز وخوسيه فرنانديز-بيكيراس

اتحاد الأبحاث الطبية الحيوية في الأمراض النادرة (CIBERER) ، إسبانيا. معهد كارلوس الثالث للصحة ، مدريد ، 28029 ، إسبانيا

بيلار لوبيز-نيفا ، خافيير سانتوس ، ماريا فيلا موراليس ، ماريا أنجيليس كوبوس-فرنانديز ، لورا غونزاليس-سانشيز وخوسيه فرنانديز-بيكيراس

وحدة السرطان وعلم الأوبئة البيئية ، المركز الوطني للأوبئة ، معهد كارلوس الثالث للصحة ، مدريد ، 28029 ، إسبانيا

اتحاد البحوث الطبية الحيوية في علم الأوبئة والصحة العامة (CIBERESP) ، 28029 ، مدريد ، إسبانيا

وحدة المعلوماتية الحيوية ، برنامج البيولوجيا الهيكلية والحوسبة الحيوية ، المركز الوطني الإسباني لأبحاث السرطان (CNIO) ، مدريد ، 28029 ، إسبانيا

وحدة المعلوماتية الحيوية ، Instituto de Parasitología y Biomedicina "López-Neyra" ، Consejo Superior de Investigaciones Científicas (IPBLN-CSIC) ، PTS Granada ، غرناطة ، 18016 ، إسبانيا

قسم الخلايا ومجموعة السرطان ، برنامج علم الأورام الجزيئي ، المركز الوطني الإسباني لأبحاث السرطان (CNIO) ، مدريد ، 28029 ، إسبانيا


جونز ، كوربين

التكيفات مركزية لدراسة التطور. وبالتالي ، فمن المدهش أننا لا نعرف سوى القليل عن الأساس الجزيئي للتطور التكيفي. الهدف من بحثي هو تحديد واستنساخ وتوصيف تطور الجينات الكامنة وراء التكيفات الطبيعية من أجل تحديد أنواع الجينات المعنية وعدد وأنواع التغيرات الجينية التي حدثت والتاريخ التطوري لهذه التغييرات. هذه البيانات سوف تتناول الأسئلة الرئيسية. على سبيل المثال ، هل تتضمن التكيفات العديد من التغييرات الجينية أم القليل منها فقط؟ ما مدى أهمية مقابل التنظيم! تغييرات الأحماض الأمينية في التكيف؟ كم مرة تشارك الجينات & # 8220new & # 8221 في التكيفات؟ هل الأليلات الأكثر تكيفًا هي طفرات جديدة أو أليلات موجودة مسبقًا تنفصل عند تردد منخفض إلى متوسط ​​داخل النوع؟ من الواضح أن الفهم الأعمق لكيفية تغير الجينات أثناء التكيف سيعطي نظرة ثاقبة لإمكانات وحدود التطور التكيفي.

مجالات البحث المحددة:

  • التحليلات الجينية للتكيفات والاختلافات بين الأنواع في ذبابة الفاكهة
  • التطور الجزيئي وعلم الوراثة السكانية للجينات الجديدة
  • التحليل التطوري لـ QTL والبيانات الجينومية

التكيفات والاختلافات الأخرى بين الأنواع في ذبابة الفاكهة

جعلت أدوات علم الأحياء الحديث تشريح الجينات الجزيئية للتكيف ممكنًا ، خاصة في ذبابة الفاكهة. حاليًا ، أستخدم الواسمات الجزيئية وتقنيات رسم خرائط QTL لرسم خريطة دقيقة للمناطق التي تحتوي على أليلات تكيفية. يتم التعرف على جينات المرشح مع التغييرات في التعبير من خلال ميكروأري ودراسات التعبير الأخرى. يتم تحديد الجينات المرشحة ذات التغييرات الهيكلية باستخدام البيانات الوراثية السكانية والاستنساخ الموضعي. بعد ذلك ، يتم تحليل الجينات المرشحة ومناطقها التنظيمية من أجل تحديد التغيرات الجينية التي حدثت وكيف تطورت.

د. سيشيليا & # 8211 على عكس الأنواع الشقيقة العامة ، يتخصص D. melanogaster و D. mauritiana و D. simulans & # 8211 في استخدام فاكهة Morinda citrifolia السامة عادةً كمضيف لها. على وجه الخصوص ، طورت D. sechellia مقاومة وتفضيل موقع البيض لـ M. citrifolia. أقوم حاليًا بتحليل وراثي لعدة سمات تكيفية في D. sechellia. حتى الآن ، قمت برسم خرائط خشن للمناطق التي تؤثر على مقاومة D. sechellia & # 8217s لجاذبية M. citrifolia. أستخدم حاليًا علامات جزيئية ومرئية إضافية لرسم خريطة دقيقة لهذه المناطق. ستركز الجهود المستقبلية على استنساخ بعض هذه العوامل التكيفية وتحديد التغيرات الجينية التي حدثت.

يمكن أن تؤدي دراسات التكيف الطبيعي إلى فهم أكبر للوراثة الجزيئية للسمات المهمة. على سبيل المثال ، ستضيف نظرة ثاقبة على الأساس الجيني لجذب D. sechellia & # 8217s إلى M. citrifolia إلى فهمنا للشم. Considerable effort has gone into identifying genes involved in olfactory perception however little progress has been made in the genetics of behavior driven by olfactory information. I have already shown that D. sechellia’s preference for M. citrifolia is a difference in response behavior rather than perception thus, the genes that have evolved in D. sechellia must be those responsible for behavior rather than detection. Once these genes are cloned, I can explore the genetic mechanism of attraction behavior and see if homologs of these genes are involved in the olfactory behavior of other species.

DPGP – D. simulans and D. yakuba

Efforts are underway to produce whole genome sequences for several other species of Drosophila (see the UC Davis – DPGP project site for details). Currently, the genomes of D. simulans and D. yakuba are in progress with several more genomes to follow (likely including D. sechellia). These data will provide new insight into how genomes evolve, which types of genes are evolving most rapidly, the relationships between recombination, DNA divergence, and DNA polymorphism, and details about the spatial and organizational evolution of genomes. At present, I am helping to develop the data structure and tools to process, analyze, and represent the sequence data from these species.

Molecular evolution and population genetics of new genes

Periodically new genes must arise. We know little about the mechanisms, frequency, or patterns underlying these events. In collaboration with Dr. David Begun, I am identifying these new genes. One intriguing candidate we have already identified is a retrotransposed Alcohol Dehydrogenase (Adh) “pseudogene” in D. guanche, D. madeirensis, and D. subobscura (Luque et al 1997). So far, we have shown that this “pseudogene” is probably a newly evolved chimeric gene composed of the retrotransposed Adh and 306 base pairs of the 5′ end of the GAPDH-like gene, CG9010. This chimeric gene is actively transcribed in bot! h D. guanche and D. subobscura. The 5′ promoters of th e chimeric gene appear similar to the CG9010 promoters and transcription patterns appear similar. Bioinfomatic analysis and studies of the chimeric gene’s protein suggest that this protein has lost the ability to process secondary alcohols.

In Drosophila there are two other examples of newly evolved genes involving the fusion of Adh with another gene. This wealth of Adh-fusion genes may, of course, reflect an ascertainment bias in favor of Adh-related genes. However, these three Adh-fusion genes may also mean that Adh is especially likely to be involved in gene fusions. To determine the frequency of fusion events, we are currently surveying many species of Drosophila for newly evolved Adh-like genes and will characterize any new genes we find.

We are also investigating the population genetics and molecular evolution of chimeric fusion genes in humans and other great apes.

Evolutionary analysis of QTL and genomic data

I also work on theoretical and statistical methods related to evolutionary genetics and genomics. This research falls into three areas: (i) estimating the number of genes underlying a quantitative trait from mapping data, (ii) looking at spatial patterns of DNA sequence evolution, and (iii) developing methods for detecting genetic changes due to natural selection.

In collaboration with Dr. Sally Otto, I have developed methods for estimating the total number of genes underlying divergent phenotypes. Our approach allow one to determine how complete a genetic mapping experiment is, how many genes may be missed, and how much of the phenotype these missed factors may affect. At present, we are trying to develop methods for using genetic data to test models of the genetics of adaptation.

Spatial patterns of genomic features

I am also using genomic data to address important evolutionary questions. Recently, I used D. melanogaster genome sequence data to estimate genome-wide levels of gene clustering and to contrast the amount of clustering among genes with similar motifs to the levels of clustering in general. All chromosomes, except the fourth, showed substantial levels of gene clusteri! ng. Although not more clustered than the average pair of adjacent genes, genes with the same primary motif occur adjacent to one another more often than expected by chance. These results may mean that these small local groups of genes share regulatory elements and evolutionary histories. I am extending these analyses to several other species in collaboration with Dr. Philip Awadalla and Dr. Sally Otto and am exploring similar spatial analyses of polymorphism and divergence data.

Detecting natural selection in DNA sequence data

Molecular evolutionists have long sought to determine which changes within the protein coding and regulatory regions of a gene were shap! ed by natural selection. If an adaptive substitution has occurred in the recent past, there should be a paucity of DNA polymorphism surrounding the site under selection. Taking advantage of this fact, Andrew Kern and I have developed a permutation approach for detecting selected sites using polarized DNA polymorphism and divergence data. This method is especially useful for detecting the effects of weak selected forces across several loci. We used this approach to analyze a large DNA polymorphism and divergence data set of D. simulans genes. Surprisingly, although replacement fixations do not on average appear to be driven by selection, preferred codons – those codons that use the most abundant tRNA – have on average been fixed by selection. We plan to apply this method to additional data sets and to look at spatial patterns of nucleotide fixation within and around genes. For instance, one could see if there is a bias in the types of polymorphism (sy! nonymous vs. non-synonymous) nearest to a type of fixation. This would give insight into the dynamics of the fixation process and its impacts on adjoining variation.



تعليقات:

  1. Kazrat

    تماما يتفق معك. في هذا الشيء هو فكرة جيدة. وهي على استعداد لدعمكم.

  2. Moogukus

    نفايات مطلقة

  3. Wachiru

    لا كلمات ، فقط المشاعر

  4. Lorineus

    في رأيي فأنتم مخطئون. دعونا نناقش. اكتب لي في PM ، سنتحدث.



اكتب رسالة