معلومة

A5. التحليلات التجريبية للالتزام - علم الأحياء

A5. التحليلات التجريبية للالتزام - علم الأحياء


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

غالبًا ما يكون من المهم تحديد Kd لمجمع ML ، نظرًا لهذا العدد وتركيزات M و L في النظام ، يمكننا التنبؤ بما إذا كانت M مرتبطة أم لا تحت ظروف فسيولوجية. مرة أخرى ، هذا مهم لأن M ملزم أو إرادة حرة تحكم نشاطه. الحيلة في تحديد Kd هي تحديد ML و L عند التوازن. كيف يمكننا التفريق بين الخالي من الترابط المربوط؟ التقنيات التالية تسمح بهذا التمييز.

التقنيات التي تتطلب فصل الالتزام عن الأراضي الحرة -

يجب توخي الحذر لضمان عدم تغيير توازن (M + L rightleftharpoons ML ) أثناء تقنية الفصل.

  • كروماتوغرافيا الترشيح الهلامي - أضف M إلى تركيز معين من L. ثم أزل الخليط على عمود ترشيح هلامي ، مع التصفية التتابعية باستخدام الترابط الحر بنفس التركيز. سيتم إزالة مجمع ML أولاً ويمكن قياسه. إذا قمت بقياس الترابط الحر الخارج من العمود ، فسيكون ثابتًا بعد مزيلات ML باستثناء غمس واحد بالقرب من المكان الذي سيتم فيه إزالة L الحرة إذا تمت إزالة العمود بدون L الحرة في محلول المخزن المؤقت. يمثل هذا الانخفاض مقدار الترابط المرتبط بـ M.
  • الترشيح الغشائي - أضف M إلى L المشع إشعاعيًا ، وقم بالتوازن ، ثم قم بالتصفية من خلال مرشح يربط M و ML. على سبيل المثال ، غشاء النيتروسليلوز يربط البروتينات بشكل لا رجعة فيه. تحديد كمية العلامة الإشعاعية L على الغشاء والتي تساوي [ML].
  • الترسيب - أضف عامل ترسيب مثل كبريتات الأمونيوم ، الذي يترسب البروتينات وبالتالي كلا M و ML. تحديد كمية ML.

التقنيات التي لا تتطلب فصل الحدود عن الأراضي الحرة

  • يعطي يجند تركيزات ML. كرر ذلك في العديد من القياسات المتكافئة المختلفة ، والتي تحدد مقدار تقنيات الربط أو التحليل الطيفي بالنسبة ل ligande 1: 1. عند التوازن ، حدد L الحر بأخذ عينات من المحلول المحيط بالكيس. عن طريق التوازن الشعاعي الكتلي الذي يمكن تحديد تركيزه باستخدام ligand- ضع M في كيس غسيل الكلى وغسيل الكلى مقابل محلول يحتوي على غسيل الكلى المتزن.
  • التحليل الطيفي - ابحث عن يجند يتغير أطياف امتصاصه أو مضانه عند ارتباطه بـ M.
  • قياس مسعر المعايرة متساوي الحرارة (ITC) - في مركز التجارة الدولية ، يتم حقن محلول عالي التركيز من مادة تحليلية (يجند) في خلية تحتوي على محلول شريك ملزم (عادةً جزيء ضخم مثل البروتين ، والحمض النووي ، والحويصلة).

الشكل: خلايا مسعر المعايرة الحرارية المتساوية

عند الارتباط ، يتم إطلاق الحرارة (تفاعل طارد للحرارة) أو يتم امتصاصها ، مما يتسبب في تغيرات طفيفة في درجة الحرارة في خلية العينة مقارنة بالخلايا المرجعية التي تحتوي فقط على محلول عازل. تقيس المزدوجات الحرارية الحساسة فرق درجة الحرارة (DT1) بين العينة والخلايا المرجعية وتطبق تيارًا للحفاظ على الفرق عند قيمة ثابتة. يتم إجراء حقن متعددة حتى يتم تشبع الجزيئات الكبيرة بالرابط. يتناسب تغيير المحتوى الحراري بشكل مباشر مع كمية الترابط المرتبط في كل حقنة ، لذا فإن الإشارة المرصودة تخفف مع مرور الوقت. يجب تصحيح التغير الفعلي في المحتوى الحراري الملحوظ من أجل التغيير في المحتوى الحراري عند التخفيف البسيط للرابط إلى محلول عازل وحده ، ويتم تحديده في تجربة منفصلة. يجب أن تكون التغيرات في المحتوى الحراري التي لوحظت بعد تشبع الجزيء الكبير بالرابط هي نفسها المحتوى الحراري لتخفيف اللجند. منحنى ملزم يُظهر تغير المحتوى الحراري كدالة للنسبة المولية للرابط إلى شريك الربط ( (L_o / M_o ) إذا كان (L_o gg M_o )) ثم يتم تحليله رياضيًا لتحديد Kd والقياس المتكافئ للربط .

الشكل: بيانات قياس السعرات الحرارية النموذجية وتحليلها المرجع: www.microcalorimetry.com/index.php؟id=312

يجب أن يكون واضحًا في المثال أعلاه ، أن التفاعل الملزم طارد للحرارة. ولكن لماذا الرسم البياني لنسبة ΔH مقابل النسبة المولية لـ Lo / Mo sigmoidal (على شكل s) وليس الزائدية؟ يأتي أحد الأدلة من حقيقة أن النسبة المولية للليغند (المعايرة) إلى الجزيء الكبير تتركز حول 1 ، لذلك ، كما هو موضح أعلاه ، عندما لا تكون Lo >> Mo ، قد لا يكون الرسم البياني قطعيًا. توضح الرسوم البيانية أدناه مثالًا محددًا لـ Kd و Ho التي يتم حسابها من بيانات قياس المسعرات المعايرة بالتحليل الحجمي. سوف يسلطون الضوء على سبب كون الرسم البياني لـ ΔH مقابل النسبة المولية لـ Lo / Mo هو السيني.

مثال محدد يوضح هذه الأفكار. تم وضع نسخ قابلة للذوبان من بروتين الغشاء الفيروسي لفيروس نقص المناعة البشرية ، gp 120 ، 4 ميكرومتر ، في خلية قياس السعرات الحرارية ، وتم وضع شكل قابل للذوبان من الربيطة الطبيعية ، CD4 ، وهو بروتين مستقبل غشائي من الخلايا التائية المساعدة ، حقنة ومعايرتها في خلية (Myszka وآخرون 2000). تم تحديد التغييرات / الحقن في المحتوى الحراري وتم تحويل البيانات وتناسبها مع معادلة توضح ΔH "تم تطبيعه مع عدد مولات يجند (CH4) المحقون في كل خطوة". يعتبر الخط المناسب للبيانات الموجودة في تلك اللوحة هو أفضل خط ملائم بافتراض وجود مقياس متكافئ 1: 1 لـ CD4 ("ligand") إلى gp 120 ("الجزيء الكبير") و Kd = 190 نانومتر. يرجى ملاحظة أن المنحنى سيني وليس زائدي.

الشكل: تحديد مقياس معايرة المعايرة لـ Kd و DH لتفاعل gp120 و CD4

لاحظ أنه يمكن تحديد القياس المتكافئ للربط (n) و KD و ΔHo في تجربة واحدة. من قيمة ΔHo و KD والعلاقة

[ΔGo = -RTlnKeq = RTlnKD = ΔHo - TΔSo ]

يمكن حساب قيم Go و ΔSo. لا حاجة لفصل الالتزام عن الحر. تم حساب تغييرات المحتوى الحراري عند الارتباط لتكون -62 كيلو كالوري / مول.

باستخدام معادلات الربط القياسية (5 و 7 و 10 أعلاه) لحساب L و ML مجانًا بتراكيز مختلفة من Lo ونسب R = Lo / Mo ، يمكن اشتقاق سلسلة من المؤامرات. تم عرض اثنين في وقت سابق في قسم الفصل هذا لتوضيح الاختلافات في Y مقابل L و Y مقابل Lo عندما لا تكون Lo >> Mo. وهي معروضة مرة أخرى أدناه:

الشكل: Y vs L و Y vs Lo عندما لا تكون Lo >> Mo

بعد ذلك ، تم عمل مخطط ML مقابل R (= [Lo] / [Mo] (أدناه ، اللوحة A1 اليمنى). يظهر هذا المنحنى زائديًا ولكن له نفس الشكل مثل الرسم البياني Y مقابل Lo أعلاه (على اليمين). ولكن إذا كان يتم رسم كمية الترابط المرتبط في كل حقنة (محسوبة بطرح [ML] للحقن i + 1 من [ML] للحقن i) مقابل R (= [Lo] / [Mo]) ، منحنى سيني (أدناه ، اللوحة A2 ، يسار) ، والذي يشبه الرسم البياني الأنسب لتحديد المحتوى الحراري أعلاه تجريبيًا. يظهر التغير النسبي في المحتوى الحراري لكل حقنة باللون الأحمر. لاحظ أن الرسم البياني في A2 يُظهر فعليًا القيمة السالبة لمقدار الترابط المرتبط لكل حقنة ، اجعل الرسم البياني يبدو على الرسم البياني الذي يوضح تتبع قياس المسعر المعايرة الفعلية والملاءمة أعلاه.

الشكل: منحنيات ملزمة تشرح بيانات قياس معايرة السيني للمعايرة السينية لـ gp120 و CD4

رنين سطح البلازمون

هناك تقنية جديدة لقياس الارتباط تسمى رنين البلازمون السطحي (SPR) باستخدام شريحة مستشعر تتكون من طبقة 50 نانومتر من الذهب على سطح زجاجي. ثم يتم إضافة مصفوفة الكربوهيدرات إلى سطح الذهب. يتم إرفاق جزيء ضخم إلى مصفوفة CHO من خلال الكيمياء التساهمية التي تحتوي على موقع ربط ليجند. يجب ألا يتم التشويش على موقع الربط على الجزيء الكبير إلى حد كبير. يتدفق سائل يحتوي على مادة الترابط على سطح الربط.

يتكون نظام الكشف من شعاع ضوئي يمر عبر منشور أعلى الطبقة الزجاجية. ينعكس الضوء تمامًا ، لكن عنصرًا آخر من الموجة يسمى الموجة الزائلة ، يمر في الطبقة الذهبية ، حيث يمكنه إثارة إلكترونات Au. إذا تم اختيار الطول الموجي والزاوية الصحيحين ، يتم إنتاج موجة طنين من الإلكترونات المثارة (رنين مأكل) على سطح الذهب ، مما يقلل من الكثافة الإجمالية للموجة المنعكسة. زاوية SPR حساسة للطبقات المرتبطة بالذهب. يكفي ارتباط وتفكك الترابط لتغيير زاوية SPR ، كما هو موضح في الشكل أدناه.

  • التين: رنين سطح البلازمون. (CC BY-SA 3.0؛ SariSabban)

الرسوم المتحركة: الموجة الفائضة SPR

يمكن لهذه التقنية التمييز بين الارتباط / التفكك السريع والبطيء للروابط (كما ينعكس في معدلات التشغيل والإيقاف) وتستخدم لتحديد قيم Kd (من خلال قياس كمية الرابطة الترابطية عند تركيز إجمالي معين من الترابط أو بشكل غير مباشر من خلال تحديد كل من kon و koff.

قاعدة البيانات الملزمة: قاعدة بيانات لتقارب الارتباط المقاس ، مع التركيز بشكل أساسي على تفاعلات البروتين التي تعتبر أهدافًا للأدوية مع جزيئات صغيرة تشبه الأدوية

PDBBind-CN: مجموعة شاملة من بيانات تقارب الربط المقاسة تجريبياً لجميع أنواع المجمعات الجزيئية الحيوية المودعة في بنك بيانات البروتين (PDB).


يساعد التحليل الجيني الفعال والمنتظم في تشريح وراثة المرض

وُجد أن العديد من المتغيرات الجينية لها ارتباط بالأمراض الوراثية ، لكن فهم أدوارها الوظيفية في التسبب في الأمراض لا يزال محدودًا. قام فريق بحث دولي ، بما في ذلك عالم الطب الحيوي من جامعة مدينة هونج كونج (CityU) ، بتطوير تقنية اختبار بيولوجي عالية الإنتاجية والتي مكنتهم من إجراء تحليل منهجي حول تأثير ما يقرب من 100000 متغير جيني على ارتباط عوامل النسخ. إلى الحمض النووي. قدمت النتائج التي توصلوا إليها بيانات قيمة للعثور على المؤشرات الحيوية الرئيسية لمرض السكري من النوع 2 للتشخيص والعلاج. ويعتقدون أنه يمكن تطبيق التقنية الجديدة على دراسات المتغيرات المرتبطة بأمراض وراثية أخرى.

شارك في قيادة الدراسة الدكتور يان جيان ، الأستاذ المساعد في قسم العلوم الطبية الحيوية في CityU ، والبروفيسور بنج رين من جامعة كاليفورنيا سان دييغو ، والبروفيسور جوسي تايبال من جامعة كامبريدج. تم نشر النتائج التي توصلوا إليها في المجلة العلمية طبيعة سجية.

"استنادًا إلى النتائج التي توصلنا إليها ، نعتقد أنه يمكن تطبيق طريقتنا التجريبية عالية الإنتاجية في دراسة الأمراض الوراثية المختلفة ، بما في ذلك سرطان القولون والمستقيم وسرطان البروستاتا. ويمكن أن تساعد في تشريح آلية الوراثة الجينية للمرض والعثور على المؤشرات الحيوية للتشخيص السريري "، قال الدكتور يان.

الكشف عن دور المتغيرات غير المشفرة في الأمراض

كانت دراسات الارتباط على مستوى الجينوم (GWAS) ، والتي تبحث في الجينوم بأكمله ، هي الاستراتيجية الأكثر أهمية في العثور على الجينات المرتبطة بالأمراض الوراثية المعقدة. وجد الباحثون مئات الآلاف من المتغيرات الجينية المرتبطة بالأمراض والصفات البشرية. لكن الدراسات حول وظائف هذه المتغيرات لا تزال محدودة.

أوضح الدكتور يان أن "فهم الوظائف الجزيئية للمتغيرات غير المشفرة سيساعدنا في معرفة سبب كون الأشخاص الذين يحملون هذه الطفرات أكثر عرضة للإصابة بالأمراض الوراثية. سيساعدنا ذلك في تطوير طرق أو استراتيجيات لمنع الأمراض أو اكتشافها أو علاجها مبكرًا". .

تتمثل إحدى وظائف المتغيرات في التأثير على ارتباط عوامل النسخ بالحمض النووي. ستتحكم عوامل النسخ بعد ذلك في التعبير الجيني في الخلايا ، مما يؤدي إلى "تشغيل" و "إيقاف" الجينات المحددة ، مما يؤدي إلى تعديل الوظائف الخلوية.

لتوصيف تأثيرات المتغيرات الجينية بشكل منهجي على ارتباط عامل النسخ ، قام الفريق بتعديل طريقتهم التجريبية التي تم تطويرها مسبقًا إلى اختبار ربط البروتين والحمض النووي عالي الإنتاجية للغاية ، والذي يُطلق عليه "تقييم تعدد الأشكال أحادي النوكليوتيدات عن طريق التطور المنهجي للروابط بواسطة الأسي" تخصيب "(SNP-SELEX). ثم اختاروا المتغيرات الجينية من مواقع الجينات على الجينوم (تسمى "مواقع الجينات") التي من المعروف أنها مرتبطة بخطر الإصابة بمرض السكري من النوع 2 كموضوع للتحليل.

باستخدام SNP-SELEX ، نجحوا في تحليل تأثير 95886 متغيرًا جينيًا على ربط 270 عامل نسخ بشري متميز بالحمض النووي. لقد أظهروا أن المتغير الجيني غير المشفر SNP rs7118999 الذي يزيد من خطر الإصابة بمرض السكري من النوع 2 يمكن أن يؤثر على ارتباط الحمض النووي بأحد عوامل النسخ ، والآلية الجزيئية الناتجة تنظم مستوى الدهون في الدم.

"هذا مثال واضح على تطبيق البيانات التي تم إنشاؤها بواسطة SNP-SELEX والتي يمكن أن تساعد في تحديد المتغيرات الجينية التي تلعب أدوارًا رئيسية في وراثة مرض السكري من النوع 2. وهذا من شأنه أن يساعد في التحقيق اللاحق في العثور على المؤشرات الحيوية التشخيصية والأهداف العلاجية ،" قال الدكتور يان.

تسريع التحليل بشكل كبير

علاوة على ذلك ، كان بإمكان الدراسات السابقة تحديد نوع واحد أو عدد قليل من المتغيرات لمعرفة آليتها الجزيئية. استغرقت كل دراسة حوالي 2-3 سنوات. "لذلك كان من المستحيل فهم الأمراض الوراثية المعقدة تمامًا مثل مرض السكري من النوع 2 والتي ترتبط بمئات المتغيرات الجينية في غضون فترة قصيرة. ولكن باستخدام SNP-SELEX ، يمكننا بشكل منهجي تحليل ما يقرب من 100000 متغير في إطار زمني أقصر بكثير ،" قال الدكتور يان.

"في هذه الدراسة ، قمنا بتغطية جزء صغير نسبيًا من المتغيرات وعوامل النسخ. لذلك سنوسع دراستنا. من خلال استخدام SNP-SELEX ، نأمل أن تساعدنا في الكشف عن الآليات الأساسية للمزيد والمزيد من هذه المتغيرات غير المشفرة جدًا قال البروفيسور رن.


محتويات

تم العثور على الأجسام المضادة الموجهة ضد الملحق A5 في المرضى الذين يعانون من مرض يسمى متلازمة antiphospholipid (APS) ، وهو مرض خثاري يرتبط بالأجسام المضادة الذاتية ضد مركبات الفوسفوليبيد.

يشكل الملحق A5 درعًا حول جزيئات الفسفوليبيد سالبة الشحنة. يمنع تكوين درع ملحق A5 دخول الفسفوليبيدات في تفاعلات التخثر (التخثر). في متلازمة الأجسام المضادة للفوسفوليبيد ، يتم تعطيل تكوين الدرع بواسطة الأجسام المضادة. بدون الدرع ، هناك كمية متزايدة من جزيئات الفوسفوليبيد على أغشية الخلايا ، مما يسرع تفاعلات التخثر ويسبب خاصية تخثر الدم لمتلازمة الأجسام المضادة للفوسفوليبيد.
أظهر أنكسين A5 انتفاخًا في سرطان الغدة الدرقية الحليمي. [5]

يتم استخدام الملحق A5 كمسبار غير كمي لاكتشاف الخلايا التي أعربت عن فسفاتيديل سيرين (PS) على سطح الخلية ، وهو حدث موجود في موت الخلايا المبرمج بالإضافة إلى أشكال أخرى من موت الخلايا. [6] [7] [8] تعرض الصفائح الدموية أيضًا PS و PE على سطحها عند تنشيطها ، والتي تعمل كموقع ربط للعديد من عوامل التخثر.

عادةً ما يستخدم اختبار التقارب الملحق A5 اقترانًا من الملحق V وعلامة الفلورسنت أو الأنزيمية أو البيوتين أو غيرها من العلامات أو عنصر مشع ، في مخزن مؤقت مناسب (الملحق في V الارتباط بالأمينوفوسفوليبيد يعتمد على Ca 2+). يجمع الاختبار بين تلطيخ الملحق V لأحداث غشاء PS و PE مع تلطيخ الحمض النووي في نواة الخلية مع بروبيديوم يوديد (PI) أو 7-أمينوكتينوميسين D (AAD-7) ، مما يميز الخلايا القابلة للحياة عن الخلايا المبرمجية والخلايا الميتة. [9] يحدث الكشف عن طريق قياس التدفق الخلوي أو مجهر التألق.


المجلد الأول

روابط هرمون الغدة الجار درقية الانتقائية المطابقة والتشوير المطول

توفر فحوصات الربط والإشارات الحركية التي يتم إجراؤها باستخدام نظائر PTH و PTHrP ligand بيانات تشير إلى أن PTHR-1 يمكنه بالفعل اعتماد تركيبات بروتينية مختلفة تعرض التقاربات التفاضلية للروابط المتنوعة هيكليًا ، وبالتالي يمكنها التوسط في أنواع مختلفة من استجابات الإشارات. 373-376 على وجه الخصوص ، تُظهر هذه الدراسات أن بعض نظائر PTH يمكن أن تشكل معقدات مع PTHR-1 التي تحافظ على حالة تقارب عالية ، حتى عند إضافة GTPγS ، وهو كاشف يعزز تفكك بروتينات G من المستقبل وبالتالي عادة يستخدم لتحويل GPCR إلى حالة تقارب منخفض. يُعتقد أن نظائر PTH ligand هذه ترتبط بتشكيل PTHR-1 جديد ، يسمى R 0 ، والذي يمكنه الحفاظ على تقارب عالٍ حتى بشكل مستقل عن اقتران بروتين G. في المقابل ، فإن الروابط الأخرى ، مثل نظائرها ذات الطول الأقصر M-PTH (1-14) ، تشكل مجمعات مع PTHR-1 التي تنفصل بسرعة عند إضافة GTPγS. 373 وفقًا لذلك ، يُعتقد أن روابط PTH هذه ترتبط بشكل أساسي بتشكيل مقترن ببروتين G يسمى RG.

لا يتم إثبات العواقب البيولوجية لمثل الانتقائية المطابقة الموجهة بواسطة الترابط في PTHR-1 من خلال تغيير في نوع مسار الإشارة (على سبيل المثال ، من مسار Gαs / cAMP / PKA نحو مسار غير بوساطة Gαs) ، ولكن بالأحرى من خلال مدة استجابة cAMP التي تحدثها الروابط المختلفة. وبالتالي ، يُنظر إلى الروابط الانتقائية R 0 على تحفيز استجابات cAMP لفترات طويلة في الخلايا التي تعبر عن PTHR-1 ، في حين تحفز روابط PTH الانتقائية RG المزيد من استجابات cAMP العابرة التي تتضاءل بعد فترة وجيزة من التعرض الأولي ليجند. في حين أن الآليات الكاملة الكامنة وراء استجابات الإشارات المطولة التي لوحظت للروابط الانتقائية R 0 بعيدة كل البعد عن الوضوح ، فإن التفسير المحتمل هو أنها تنشأ من قدرة الترابط على البقاء مرتبطًا بالمستقبل من خلال جولات متعددة ومتكررة من الاقتران بـ Gαs . على أي حال ، فإن التأثيرات قوية ويمكن ملاحظتها ليس فقط في أنظمة زراعة الخلايا ، ولكن أيضًا في الحيوانات ، حيث ثبت أن الروابط الانتقائية R 0 تحفز زيادات في مستويات الكالسيوم في الدم وانخفاض في مستويات الفوسفات في الدم التي تستمر في على الأقل عدة ساعات أطول من تلك التي لوحظت لـ PTH (1-34) ، حتى عندما يتم حقن التناظرية R 0 بجرعة أقل بعدة أضعاف من الجرعة المستخدمة لـ PTH (1-34). 374376

يسمى التناظرية طويلة المفعول ذات الأهمية الخاصة LA-PTH ، عبارة عن ببتيد هجين يتكون من تسلسل M-PTH (1-14) مرتبط بتسلسل PTHrP (15-36). 376 يرتبط LA-PTH بالتشكيل R 0 PTHR-1 مع تقارب أعلى بعدة أضعاف من PTH (1-34) ، وفي حين أن فعالية cAMP المقاسة لـ LA-PTH هي نفسها التي تم قياسها لـ PTH (1-34) ، تمشيا مع تقاربات ربط RG المكافئة ، فإن استجابة cAMP التي يسببها LA-PTH تستمر لعدة ساعات أطول من تلك التي يسببها PTH (1-34). عند حقنها في الفئران ، تحفز LA-PTH ارتفاعات من الكالسيوم في الدم يمكن أن تستمر لمدة 24 ساعة أو أكثر ، بينما ينتج عن الحقن PTH (1-34) بنفس الجرعة استجابات تستمر بضع ساعات فقط (الشكل 56-10) . الأهم من ذلك ، أوضحت دراسات الحرائك الدوائية أن الاستجابات المطولة لنظائر PTH الانتقائية R 0 لا ترجع إلى فترات طويلة من الببتيدات في الدورة الدموية ، وبالتالي فمن المرجح أن تكون بسبب الارتباط المستمر للروابط إلى PTHR-1 في الخلايا المستهدفة للعظام والكلى. نظرًا لأفعالهم المطولة في الجسم الحي ، يبدو أن فئة نظائر PTH الانتقائية R 0 تبشر بالخير كخط جديد محتمل للعلاج للمرضى الذين يعانون من قصور الدريقات. 135


محتويات

يتكون الجهاز الأساسي من مجهر ضوئي ومصدر ضوئي وبعض مسبار الفلورسنت. يعتمد انبعاث الفلورسنت على امتصاص لون أو طول موجي بصري معين مما يقيد اختيار المصابيح. الأكثر شيوعًا ، يتم استخدام مصدر واسع النطاق للزئبق أو الزينون بالاقتران مع مرشح اللون. تبدأ التقنية بحفظ صورة خلفية للعينة قبل التبييض الضوئي. بعد ذلك ، يتم تركيز مصدر الضوء على رقعة صغيرة من المنطقة القابلة للعرض إما عن طريق التبديل إلى هدف مجهر تكبير أعلى أو باستخدام ضوء الليزر ذي الطول الموجي المناسب. تتلقى الفلوروفورات في هذه المنطقة إضاءة عالية الكثافة مما يؤدي إلى انقضاء عمر الفلورة بسرعة (يقتصر على ما يقرب من 10 5 فوتونات قبل الانقراض). الآن الصورة في المجهر هي صورة مجال فلورسنت موحد مع بقعة مظلمة ملحوظة. مع تقدم الحركة البراونية ، ستنتشر المجسات التي لا تزال مشعة في جميع أنحاء العينة وتحل محل المجسات غير الفلورية في المنطقة المبيضة. يستمر هذا الانتشار بطريقة منظمة ، يمكن تحديدها تحليليًا من معادلة الانتشار. بافتراض وجود ملف تعريف غاوسي لحزمة التبييض ، ثابت الانتشار د يمكن حسابها ببساطة من:

أين ث هو نصف قطر الشعاع و رد هو وقت الانتشار "المميز". [1] [2]

تحرير طبقات الدهون الثنائية المدعومة

في الأصل ، كانت تقنية FRAP مخصصة للاستخدام كوسيلة لوصف تنقل جزيئات الدهون الفردية داخل غشاء الخلية. [1] مع توفير فائدة كبيرة في هذا الدور ، فإن البحث الحالي يميل أكثر نحو التحقيق في الأغشية الدهنية الاصطناعية. بدعم من ركائز محبة للماء أو كارهة للماء (لإنتاج طبقات ثنائية من الدهون أو طبقات أحادية الطبقة على التوالي) ودمج بروتينات غشائية ، من المحتمل أن تكون هذه الهياكل المحاكية الحيوية مفيدة كأجهزة تحليلية لتحديد هوية المواد غير المعروفة ، وفهم النقل الخلوي ، وتحديد مواقع ربط الترابط.

تحرير ارتباط البروتين

تستخدم هذه التقنية بشكل شائع مع بروتينات اندماج البروتينات الخضراء الفلورية (GFP) ، حيث يتم دمج البروتين المدروس في GFP. عندما يكون متحمسًا بطول موجي معين للضوء ، فإن البروتين سوف يتألق. [3] عندما يتم إنتاج البروتين الذي تتم دراسته باستخدام GFP ، يمكن تتبع التألق. يمكن أن يكشف التحليل الضوئي لـ GFP ، ثم مشاهدة إعادة التكاثر في المنطقة المبيضة عن معلومات حول شركاء تفاعل البروتين واستمرارية العضية وتهريب البروتين. [4]

إذا لم يصل التألق بعد مرور بعض الوقت إلى المستوى الأولي ، فإن جزءًا من الفلورة ناتج عن جزء غير متحرك (لا يمكن تجديده بالانتشار). وبالمثل ، إذا ارتبطت البروتينات الفلورية بمستقبلات الخلايا الثابتة ، فسيتم إعاقة معدل الاسترداد بعامل متعلق بمعاملات الارتباط والتفكك للربط. تم استغلال هذه الملاحظة مؤخرًا للتحقيق في ارتباط البروتين. [3] [5] [6] وبالمثل ، إذا تم دمج البروتين المسمى GFP بشكل أساسي في مجمع أكبر ، فإن ديناميكيات استرداد الفلورة سوف تتميز بانتشار المعقد الأكبر. [7]

يمكن أيضًا استخدام FRAP لمراقبة البروتينات خارج الغشاء. بعد جعل البروتين موضع الاهتمام الفلوري ، بشكل عام عن طريق التعبير كبروتين اندماج GFP ، يتم استخدام مجهر متحد البؤر لتبييض ضوئي ومراقبة منطقة من السيتوبلازم ، [3] المغزل الانقسامي ، أو النواة ، أو بنية خلوية أخرى. [8] يمكن بعد ذلك رسم متوسط ​​التألق في المنطقة مقابل الوقت منذ عملية التبييض الضوئي ، ويمكن أن ينتج عن المنحنى الناتج معاملات حركية ، مثل تلك الخاصة بتفاعلات ربط البروتين و / أو معامل انتشار البروتين في الوسط الذي يوجد فيه مراقب. [9] غالبًا ما تكون الديناميكيات الوحيدة التي يتم أخذها في الاعتبار هي تفاعلات الانتشار والربط / فك الارتباط ، ومع ذلك ، من حيث المبدأ ، يمكن للبروتينات أيضًا أن تتحرك عبر التدفق ، أي أن تخضع لحركة موجهة ، وقد تم التعرف على هذا مبكرًا جدًا بواسطة Axelrod et al. [1] قد يكون هذا بسبب تدفق السيتوبلازم أو النيوكليوبلازم ، أو النقل على طول الخيوط في الخلية مثل الأنابيب الدقيقة بواسطة المحركات الجزيئية.

يكون التحليل أكثر بساطة عندما يكون الانتعاش الفلوري محدودًا إما بمعدل الانتشار في المنطقة المبيضة أو بالمعدل الذي يتم فيه فك البروتينات المبيضة من مواقع الارتباط الخاصة بها داخل المنطقة المبيضة ، ويتم استبدالها بالبروتين الفلوري. دعونا نلقي نظرة على هذين الحدين ، للحالة الشائعة لتبييض بروتين اندماج GFP في خلية حية.

تحرير الانتعاش الأسفار محدودة الانتشار

من الناحية العملية ، لن يكون أي من هذه الافتراضات صحيحًا تمامًا في الخلية.

  1. لن يكون التبييض فوريًا. على وجه الخصوص إذا كان التبييض القوي لمساحة كبيرة مطلوبًا ، فقد يستغرق التبييض جزءًا كبيرًا من النطاق الزمني للانتشار τ D < displaystyle tau _>. ثم ينتشر جزء كبير من البروتين المبيض خارج المنطقة المبيضة في الواقع أثناء التبييض. سيؤدي عدم أخذ هذا في الاعتبار إلى حدوث خطأ كبير في د. [11][12][13]
  2. لن يكون ملف التعريف المبيض وظيفة خطوة شعاعية. إذا كانت البقعة المبيضة عبارة عن بكسل واحد بشكل فعال ، فسيكون التبييض كدالة للموضع عادةً محدودًا ومحددة من خلال بصريات مجهر المسح بالليزر المتحد البؤر المستخدم. هذه ليست وظيفة خطوة شعاعية وهي تختلف أيضًا على طول المحور العمودي على المستوى.
  3. الخلايا بالطبع ثلاثية الأبعاد وليست ثنائية الأبعاد ، كما هو الحال مع الحجم المبيض. إهمال الانتشار خارج المستوى (نعتبر هذا هو س ص الطائرة) سيكون تقريبيًا معقولًا فقط إذا استعاد التألق في الغالب عن طريق الانتشار في هذه الطائرة. سيكون هذا صحيحًا ، على سبيل المثال ، إذا تم تبييض حجم أسطواني مع محور الأسطوانة على طول ض المحور ومع هذا الحجم الأسطواني الذي يمر عبر الارتفاع الكامل للخلية. ثم ينتشر على طول ض لا يتسبب المحور في استعادة الفلورة حيث يتم تبييض كل البروتين بشكل موحد على طول ض المحور ، وإهماله ، كما تفعل معادلة Soumpasis ، غير ضار. ومع ذلك ، إذا كان الانتشار على طول ض يساهم المحور في استعادة الفلورة ثم يجب حسابه.
  4. لا يوجد سبب لتوقع أن يكون السيتوبلازم الخلوي أو النيوكليوبلازم موحدًا مكانيًا تمامًا أو متناحًا تمامًا.

وبالتالي ، فإن معادلة Soumpasis هي مجرد تقريب مفيد ، يمكن استخدامه عندما تكون الافتراضات المذكورة أعلاه تقريبية جيدة للوضع الحقيقي ، وعندما يكون استرداد التألق محدودًا بالفعل من خلال النطاق الزمني للانتشار τ D >. لاحظ أنه لمجرد أن نظام Soumpasis يمكن تركيبه بشكل مناسب على البيانات لا يعني بالضرورة أن الافتراضات صحيحة وأن الانتشار يهيمن على الاستعادة.

تحرير الانتعاش محدودة رد الفعل

المعادلة التي تصف التألق كدالة للوقت بسيطة بشكل خاص في حد آخر. إذا ارتبط عدد كبير من البروتينات بمواقع في حجم صغير بحيث تكون إشارة التألق هناك تهيمن عليها إشارة من البروتينات المرتبطة ، وإذا كان هذا الارتباط كله في حالة واحدة مع معدل إيقاف kإيقاف، ثم يتم إعطاء التألق كدالة للوقت بواسطة [14]

لاحظ أن الاسترداد يعتمد على معدل ثابت لفك الربط ، كإيقاف، فقط. لا تعتمد على معدل الربط للربط. على الرغم من أنه يعتمد على عدد من الافتراضات [14]

  1. يجب أن يكون معدل on كبيرًا بدرجة كافية حتى يتجاوز التركيز المحلي للبروتين المرتبط التركيز المحلي للبروتين الحر ، وبالتالي يسمح لنا بإهمال المساهمة في F من البروتين المجاني.
  2. التفاعل هو تفاعل بسيط ثنائي الجزيء ، حيث يرتبط البروتين بالمواقع الموضعية التي لا تتحرك بشكل ملحوظ أثناء التعافي
  3. يكون التبادل أبطأ بكثير من الانتشار (أو أي آلية نقل مسؤولة عن التنقل) ، حيث عندها فقط يتعافى الجزء المنتشر بسرعة ثم يعمل كمصدر للبروتين الفلوري الذي يربط ويستبدل البروتين المبيض المرتبط وبالتالي يزيد من التألق. مع ص نصف قطر البقعة المبيضة ، وهذا يعني أن المعادلة صالحة فقط إذا كان العمر المحدد 1 / k off & gt & gt r 2 / D < displaystyle 1 / k _ < text> & gt & gtr ^ <2> / D>.

إذا تم استيفاء جميع هذه الافتراضات ، فإن ملاءمة الأسي لمنحنى الاسترداد سيعطي معدل الخروج ثابتًا ، كإيقاف. ومع ذلك ، يمكن للديناميكيات الأخرى أن تعطي منحنيات استرداد مماثلة للأسي ، لذا فإن ملاءمة الأسي لا يعني بالضرورة أن الاسترداد يسيطر عليه تفاعل بسيط ثنائي الجزيء. تتمثل إحدى طرق التمييز بين الاسترداد بمعدل يتم تحديده عن طريق فك الارتباط والاسترداد المحدود بالانتشار ، في ملاحظة أن معدل الاسترداد للاسترداد المحدود غير المقيد مستقل عن حجم المنطقة المبيضة ص، بينما يتدرج كـ r - 2 < displaystyle r ^ <-2>> ، من أجل الانتعاش المحدود بالانتشار. وبالتالي ، إذا تم تبييض مساحة صغيرة وكبيرة ، وإذا كان الاسترداد محدودًا بفك الارتباط ، فستكون معدلات الاسترداد هي نفسها بالنسبة لحجمي المنطقة المبيضة ، بينما إذا كان الاسترداد محدودًا بالانتشار ، فسيكون أبطأ بكثير بالنسبة للمبيض الأكبر. منطقة.

تحرير الانتشار ورد الفعل

بشكل عام ، لن يهيمن على انتعاش الفلورة إما الانتشار المتناحي البسيط ، أو بمعدل فك واحد بسيط. سيكون هناك كل من الانتشار والربط ، وبالفعل قد لا يكون ثابت الانتشار منتظمًا في الفضاء ، وقد يكون هناك أكثر من نوع واحد من مواقع الربط ، وقد يكون لهذه المواقع أيضًا توزيع غير منتظم في الفضاء. قد تكون عمليات التدفق مهمة أيضًا. يشير هذا السلوك الأكثر تعقيدًا إلى أن نموذجًا به العديد من المعلمات مطلوب لوصف نماذج البيانات مع إما ثابت انتشار واحد د أو ثابت معدل إيقاف واحد ، كإيقاف، غير كافية.

هناك نماذج مع كل من الانتشار والتفاعل. [2] لسوء الحظ ، قد يوفر منحنى FRAP واحد أدلة غير كافية لتلائم بشكل موثوق وفريد ​​(ربما صاخبة) البيانات التجريبية. صادق زاده وآخرون. [15] أظهرت أن منحنيات FRAP يمكن تركيبها بواسطة مختلف أزواج قيم ثابت الانتشار وثابت المعدل ، أو بعبارة أخرى ، التي تلائم FRAP ليست فريدة. هذا في ثلاث معلمات (ثابت على المعدل ، ثابت خارج المعدل وثابت الانتشار) يناسب. النوبات التي ليست فريدة من نوعها ، ليست مفيدة بشكل عام.


تحليل لتأثيرات الأس الهيدروجيني على ارتباط الأكسجين بالحبار (إليكس إليسبروسوس ، لوليجو بيلي) الهيموسيانين

HANS-OTTO PÖRTNER تحليل لتأثيرات الأس الهيدروجيني على ارتباط الأكسجين بالحبار (إليكس إليسبروسوس ، لوليجو بيلي) الهيموسيانين. J أكسب بيول 1 مايو 1990 150 (1): 407-424. دوى: https://doi.org/10.1242/jeb.150.1.407

عنوان طلبات إعادة الطباعة.

ال في المختبر تم فحص خصائص ارتباط الهيموسيانين بالأكسجين في الدم الكامل لنوعين من الحبار السطحي ، إليكس إيلسيبروسوس و Loligo pealei. معاملات هالدين المستقلة عن الرقم الهيدروجيني (ΔHCO3 - / Δ HcyO2) (حيث HcyO2 هو أكسجين مرتبط بالهيموسيانين) أصغر قليلاً من -1 في كلا النوعين. ثاني أكسيد الكربون المرتبط بالأكسجين2 لم يكن ملزمًا. تراوحت قيم المخزن المؤقت بين 5 و 5.8 مول لتر −1 وحدة الأس الهيدروجيني −1. لمزيد من التحليلات ، تم اختيار مخطط pH / تشبع لإظهار تأثير الأس الهيدروجيني على ارتباط الأكسجين بشكل ثابت صاO2 في مؤامرة مستمرة. منحدرات تساوي الأوكسجين الناتج (Δ HcyO2/ ΔpH أو Δس/ Δصح) (أين س هو تشبع الأكسجين) يعتمد على الرقم الهيدروجيني. يسمح الرسم البياني بتقييم كل من معاملات بوهر (Δlogص50/ ΔpH) ومعاملات هيل (ن50) عند قيم الأس الهيدروجيني المحددة. يوفر توضيحًا متكاملًا لأهمية تأثير Bohr وتعاونه لربط الأكسجين.

وفقًا لمعادلة ارتباط Wyman ، وجد أن معاملات Bohr و Haldane متطابقة. كلاهما مستقل عن الرقم الهيدروجيني بين الرقم الهيدروجيني 7 و 8. من المرجح أن تعكس المنحدرات المتغيرة لأشرطة تساوي الأكسجين التغيرات في التعاون مع صH. الحد الأقصى لقيم ن50 يتزامن مع أقصى انحدار لأيزوبار الأكسجين في النطاق الفسيولوجي لـ صكف صاO2. بافتراض أن الهيموسيانين يعمل كمخزن للأوردة صاO2، تتم مناقشة هذا الحد الأقصى في حساسية الأس الهيدروجيني وانخفاضه في نطاقات الأس الهيدروجيني الأعلى والأدنى في ضوء الحفاظ على وظيفة الصباغ في الجسم الحي.


A5. التحليلات التجريبية للالتزام - علم الأحياء

إذا كان فيروسًا ، فإننا ندرسه & # 8211 كيف يعمل ومن أين أتوا ، لفهم الأمراض الجديدة بشكل أفضل قبل حدوثها. يرجى زيارة موقع Neuman Lab الإلكتروني لمزيد من المعلومات حول المختبر ومشاريعنا الحالية.

تتباين جسيمات فيروس كورونا والفيروسات الإنفلونزا إلى حد كبير في المظهر ، والبروتينات التي تتحكم في شكل وحجم الفيروس هي نفسها التي توجه عملية تجميع الفيروسات الجديدة. Understanding these proteins is key to designing better vaccines and opens up new ways to potentially control infection by limiting not just what goes into a cell, but also what comes out. We have used cryo-electron microscopy and mass spectroscopy to probe the structure of virion proteins and the ways that changes in protein conformation are linked to the assembly process.

Viruses like SARS-CoV-2 that seem new to us are usually just recently arrived from another species. Finding and understanding viruses before they cause problems is an important component of pandemic preparedness. We use bioinformatics and molecular biology approaches to discover new RNA viruses, which are also a source of useful proteins that can potentially be exploited as molecular tools.

Part of understanding a virus is learning how each component contributes to the replication cycle. Taking away components that are important to the virus is a good strategy for designing and testing new antivirals. We believe that building up a good suite of antivirals as a complement to vaccines, can be a hedge against the rise of potentially vaccine-resistant viral strains.

We also look for the good in viruses. Phage therapy, where bacteria-killing viruses are deliberately used to control the growth of harmful bacteria and improve the growth of important food crops. We are exploring new methods like experimental evolution to create more effective phage cocktails for agricultural use


ChIP in series: Sequential ChIP

Amit Paul , Nicole C. Riddle , in Epigenetics Methods , 2020

2.2.1 DNA footprinting

To overcome the limitations of the EMSA, which provides no information regarding which DNA sequences a particular chromatin protein interacts with, DNA footprinting is used. The DNA footprinting method is based on the principle that the site where a protein binds to DNA is protected from nuclease digestion, which means that by isolating the “protected” pieces of DNA the precise protein binding site can be identified [38–40] . DNA footprinting is a very sensitive technique, robust protocols are available, and it is an excellent method of choice to identify binding motifs in a limited sequence context [41] . Initially, footprinting was developed as an في المختبر technique, newer methods allow for the study the of DNA/protein interactions في الجسم الحي. Mueller and colleagues developed ligation mediated PCR (LMPCR) in 1989 to study the interaction between the developmentally regulated enhancer of the muscle creatine kinase (MCK) gene and the myogenic regulator MyoD1 (Myogenic Differentiation 1) [42] . The LMPCR footprinting approach demonstrated that MyoD1 was bound at several sites in the enhancer region of actively transcribed MCK in differentiated muscle cells but absent from these sites in non-differentiated myogenic cells [42] . Similarly, LMPCR footprinting was used to demonstrate that the mdm2 oncogene promoter contains a p53 response element that is bound by p53 during transcriptional activation of mdm2 [43] . Restriction endonuclease digestion followed by LMPCR was used to map the polymerase density at the heat shock responsive Hsp82 promoter [44] , and في الجسم الحي LMPCR was used to show that the transcription factor NFI acts as a powerful repressor of the p21 gene transcription, binding a target site between nucleotide position − 161 and − 149 relative to the transcription start site (TSS) [45] . These examples illustrate that DNA footprinting methods remain useful for the study of protein/DNA interactions in the chromatin context, specifically if very high resolution at a small number of loci is needed.

In recent years, efforts have been made to develop genome-wide methods for DNA footprinting. For example, DNase-seq (DNase I hypersensitive sites sequencing), developed by Boyle and colleagues in 2008, a technique in which nuclei are digested with DNase I (Deoxyribonuclease I), and after several processing steps including end repair, linker ligation, and digestion, the sequences adjacent to the DNase I cut sites are identified by next generation sequencing [46] (for a detailed protocol, see [47] ). Boyle and colleagues use this technique to map DNase I hypersensitive sites in human primary CD4 (cluster of differentiation 4) + T cells, allowing them to map regions of open chromatin across the genome [46] . Hesselberth and colleagues used a similar method involving DNase I digestion followed by next generation sequencing to carry out “digital genomic footprinting” [48] . Their analysis of yeast chromatin revealed large numbers of protected regions indicative of transcription factor binding or precisely positioned nucleosomes [48] . The genome-wide DNA footprinting approaches continue to evolve, and in 2019, XL (crosslink)-DNase-seq, which includes a light cross-linking step was introduced by Oh and colleagues to allow for the mapping to factors with shorter chromatin occupancy rates [49] . These examples illustrate that DNA footprinting continues to be utilized by researchers needing high resolution information on binding of chromatin components.


Tyrosine Phosphorylation

Scott T. Brady , . Scott T. Brady , in Basic Neurochemistry (Eighth Edition) , 2012

Receptor protein tyrosine phosphatases consist of an extracellular domain, a transmembrane domain and one or two intracellular catalytic domains

RPTPs can be divided into different classes by the structural features of the extracellular domain ( Fig. 26-10 ), which includes the immunoglobulin-like, fibronectin III-like, MAM and carbonic anhydrase domains ( Hunter, 1996 ). The immunoglobulin-like domains contain intramolecular disulfide bonds and a homophilic binding site for cell–cell adhesion molecules, such as neural cell adhesion molecule (NCAM). The fibronectin III-like domains originally were identified in the extracellular matrix protein fibronectin. They consist of conserved hydrophobic residues and may interact with integrins. The MAM domains are named because of their presence in meprins, A5 glycoprotein and PTPm. These domains contain four conserved cysteine residues. The carbonic anhydrase domains contain only one of the three histidine residues required for catalyzing the hydration of carbon dioxide and are unlikely to be catalytically active. It has been suggested that both the MAM and carbonic anhydrase domains play a role in cell adhesion (see Chapter 9).

The catalytic domains of RPTPs are in the intracellular region of the protein. Most RPTP families, except RPTPβ, contain two tandem catalytic domains. The proximal catalytic domain of most RPTPs contains all of the enzymatic activity. The distal catalytic domain appears to be inactive in some cases, critical catalytic residues are missing. Despite the lack of enzyme activity, the distal catalytic domain may be important for mediating intra- or intermolecular interactions and biological activity of RPTPs. It has been shown that a chimeric CD45 in which the distal catalytic domain is replaced with an equivalent region from LAR becomes deficient in the induction of interleukin-2 secretion and ZAP-70 phosphorylation.

It was originally believed that PTP activity was constitutive and that tyrosine phosphorylation was regulated solely by activating the PTKs. However, it is now clear that PTPs play an active role in the regulation of tyrosine phosphorylation ( Stoker, 2005 Tonks, 2006 ). This was suggested first by the discovery of RPTPs, such as CD45, that have a large extracellular domain reminiscent of that of RPTKs. Their activities are regulated by ligand binding to the extracellular domain. Chimeric studies fusing the intracellular domain of CD45 with the extracellular and transmembrane domains of the EGFR show that the CD45 intracellular catalytic domain is constitutively active. Addition of EGF suppresses the PTP activity of the chimera, suggesting that dimerization may negatively regulate RPTP activity ( Desai et al., 1993 ). The mechanism of dimerization-induced inhibition has been revealed by crystallographic studies of an RPTPα fragment consisting of membrane-proximal region and the proximal catalytic domain ( Tonks, 2006 ). These fragments form symmetrical dimers in which the active site of one molecule is blocked by an inhibitory wedge from the membrane-proximal region of the other. Based on this model, the inactive distal catalytic domain may promote tyrosine phosphatase activity of CD45 by competing with and inhibiting homodimerization of the proximal catalytic domain. In summary, activity of RPTPs may be diminished by ligand-induced dimerization, in contrast to activation by dimerization of RPTKs.


BD FACSymphony™ A5 Cell Analyzer

Contact your local representative to discuss the ideal instrument to meet your needs.

The BD FACSymphony™ A5 Cell Analyzer improves sensitivity to enable you to identify and analyze rare cell types and events

The instrument features an ultra-quiet VPX electronics system that supports up to 50 high-performance detectors.

The capabilities of this platform technology uniquely allow you to conduct deep and broad phenotyping and gain richer scientific insights by fully leveraging the broad portfolio of catalog and custom BD Horizon Brilliant™ Reagents.

The BD FACSymphony™ A5 Cell Analyzer allows you to select up to 9 lasers for maximum flexibility with new lasers, dyes and applications in the pipeline

Configure your instrument to meet your research needs using traditional or unique wavelengths and power ratings.

Optical arrays offer more flexibility than ever

  • Classic tube photomultiplier tubes (PMTs) in decagon arrays with up to 10 detectors
  • Small square form PMT and GaAs/GaAsP* detectors in high-parameter cascade (HPC) arrays
    • Detectors optimized for increased sensitivity and lower noise in ranges of the spectrum
    • Up to 20 detectors per laser
    • Discrete pre-amplifiers

    Filter sets are exchangeable for traditional fluorescent markers as well as specialized sets for unique dyes or proteins.

    * Gallium arsenide phosphide

    The BD ® High Throughput Sampler (HTS) and BD FACSFlow™ Supply System (FFSS) options are available for increased efficiency

    The HTS option:

    • Automates and accelerates sample acquisition
    • Compatible with 96- and 384-well plates
    • <0.5% sample carryover in high-throughput mode

    The FFSS option:

    • Increases capacity and ease of use while maintaining a stable fluidics pressure
    • Reduces daily maintenance by incorporating a 20-L BD FACSFlow™ Cubitainer

    As a Special Order Research Product (SORP), the BD FACSymphony™ A5 Cell Analyzer offers a choice of lasers from 26 different laser wavelengths to optimally configure your instrument for your specific research application.

    For most lasers, multiple power ratings that can be adjusted, stored and recalled using the digital laser command and control functionality are available.

    Dependent on the laser, power settings from 20–1,000 mW may be available.

    Fluorochrome availability and excitation characteristics across various wavelengths should be discussed during the configuration process to identify the best optical options for your research.

    الليزر Wavelength (nm) Power (mW)
    UV 355 20–100
    البنفسجي 405 100–200
    أزرق 488 100–200
    Yellow-Green 561 100–200
    أحمر 637 140

    The BD FACSymphony™ A5 Cell Analyzer works with conventional and BD Horizon Brilliant™ Fluorochromes to expand experimental design and help accelerate time to insight

    Enable on-site training and instrument characterization with CD4 fluorochrome evaluation kits

    Each BD fluorochrome optimized for flow cytometry has been conjugated to anti-human or mouse CD4 and is provided for PMT voltrations and instrument characterization. Higher-parameter configurations may also include custom fluorochromes suitable for additional channels. Mid- and low-expressed antigen specificities are available on a custom basis.

    Representative PMTV titration and measured stain index of PBMCs stained with clone SK3 mouse anti-human CD4 acquired at varying PMTVs in 25 V increments. Stain index and resolution for this detector is nearing maximal at a PMTV of 425 V and above as indicated by the square.

    Reduce cost and risk of optimizing new high-parameter panels

    Speak with your representative about including reagents as part of your instrument purchase to enable you to minimize the cost and risk of optimizing new high-parameter panels on your BD FACSymphony™ Cell Analyzer.

    Our high-parameter specialists will work with you to identify the optimal panel for your experimental design and instrument configuration and provide the reagents needed to get to the final rendition of your panel.


    مراجع

    Schepers A, de Vries MR, van Leuven CJ, Grimbergen JM, Holers VM, Daha MR, van Bockel JH, Quax PH

    Leon C, Nandan D, Lopez M, Moeenrezakhanlou A, Reiner NE

    Virmani R, Kolodgie FD, Burke AP, Farb A, Schwartz SM

    Andree HA, Stuart MC, Hermens WT, Reutelingsperger CP, Hemker HC, Frederik PM, Willems GM

    Chen HH, Vicente CP, He L, Tollefsen DM, Wun TC

    Thiagarajan P, Benedict CR

    van Heerde WL, Sakariassen KS, Hemker HC, Sixma JJ, Reutelingsperger CP, De Groot PG

    Kenis H, Hofstra L, Reutelingsperger CP

    van Genderen HO, Kenis H, Hofstra L, Narula J, Reutelingsperger CP

    Boersma HH, Kietselaer BL, Stolk LM, Bennaghmouch A, Hofstra L, Narula J, Heidendal GA, Reutelingsperger CP

    Leroyer AS, Tedgui A, Boulanger CM

    van Tits LJ, van Heerde WL, van der Vleuten GM, de Graaf J, Grobbee DE, van de Vijver LP, Stalenhoef AF, Princen HM

    Ravassa S, Gonzalez A, Lopez B, Beaumont J, Querejeta R, Larman M, Diez J

    Peetz D, Hafner G, Blankenberg S, Peivandi AA, Schweigert R, Brunner K, Dahm M, Rupprecht HJ, Mockel M

    Landmesser U, Hornig B, Drexler H

    Frey B, Munoz LE, Pausch F, Sieber R, Franz S, Brachvogel B, Poschl E, Schneider H, Rodel F, Sauer R, Fietkau R, Herrmann M, Gaipl US

    Henson PM, Bratton DL, Fadok VA

    Whitman SC, Ravisankar P, Daugherty A

    Lardenoye JH, Delsing DJ, de Vries MR, Deckers MM, Princen HM, Havekes LM, van Hinsbergh van Weel , van Bockel JH, Quax PH

    Monraats PS, Pires NM, Schepers A, Agema WR, Boesten LS, de Vries MR, Zwinderman AH, de Maat MP, Doevendans PA, de Winter RJ, Tio RA, Waltenberger J, 't Hart LM, Frants RR, Quax PH, van Vlijmen BJ, Havekes LM, van der LA, van der Wall EE, Jukema JW

    Schepers A, Eefting D, Bonta PI, Grimbergen JM, de Vries MR, van W, V , de Vries CJ, Egashira K, van Bockel JH, Quax PH

    Heeneman S, Lutgens E, Schapira KB, Daemen MJ, Biessen EA

    Lardenoye JH, de Vries MR, Grimbergen JM, Havekes LM, Knaapen MW, Kockx MM, van Hinsbergh VW, van Bockel JH, Quax PH

    Sugawara J, Komine H, Hayashi K, Yoshizawa M, Yokoi T, Otsuki T, Shimojo N, Miyauchi T, Maeda S, Tanaka H

    Kemerink GJ, Liu X, Kieffer D, Ceyssens S, Mortelmans L, Verbruggen AM, Steinmetz ND, Vanderheyden JL, Green AM, Verbeke K


    شاهد الفيديو: هام:مهارة لحل أي سؤال وراثة بأقل من 5دقائق. (قد 2022).


تعليقات:

  1. Mikazragore

    في هذا شيء. قبل أن أفكر بخلاف ذلك ، شكراً للمساعدة في هذا السؤال.

  2. Retta

    بشكل رائع ، رسالة جيدة جدا

  3. Vuran

    لقد أصبت العلامة.

  4. Tem

    أيضا ماذا تفعل في هذه الحالة؟

  5. Dole

    سؤال رائع

  6. Kazikasa

    أعني أنك لست على حق. أدخل سنناقش. اكتب لي في رئيس الوزراء ، سنتحدث.

  7. Moketoveto

    أهنئ ، هذا الفكر الممتاز يجب أن يكون عن قصد بالضبط



اكتب رسالة